花青素对胰岛素的作用(花青素胰岛素)

【摘要】 目的: 探讨低聚原花青素(opc)对1型糖尿病 (t1dm) 小鼠血脂代谢和胰岛功能的影响及意义。方法：用链脲佐菌素(stz)小量多次腹腔注射制作t1dm小鼠模型;实验组分3个剂量每天灌胃opc液,模型对照组和正常对照组则灌胃等容积蒸馏水。4周末酶法检测动物血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdlc)和低密度脂蛋白胆固醇(ldlc)含量;免疫组织化学法检查胰腺组织胰岛中胰岛素蛋白的表达。结果：与模型对照组比较，opc给药组症状改善;血清tc、tg和ldlc明显降低(p<0.05，p<0.01);hdlc有所增加，但不具统计学差异(p>0.05)。胰腺组织免疫组化染色结果显示：模型组胰岛中有多量淋巴细胞浸润，仅少量残留的胰岛细胞被染成棕色，胰岛素表达明显减少; opc组胰岛中着色的胰岛细胞明显增多，胰岛素表达明显增加，淋巴细胞浸润明显减少。结论: opc能够降低糖尿病小鼠的血脂含量，提高胰岛分泌功能，减轻由stz诱导的自身免疫反应，有利于改善糖尿病症状和减少糖尿病心血管并发症的发生。

【关键词】 低聚原花青素;1型糖尿病;血脂;胰岛素

心血管并发症是糖尿病(diabetes mellitus，dm)的主要并发症和致死原因，而脂代谢异常是糖尿病患者发生心血管并发症的重要危险因素[1]。天然抗氧化剂低聚原花青素(oligomeric proanthocyanidin，opc) 由于具有降血糖、降血脂及免疫调节等作用和高效、低毒、高生物利用率等特点而受到医药界的广泛重视[2，3]，本文研究opc对1型糖尿病(type1 diabetes mellitus，t1dm)小鼠血脂代谢以及胰岛素表达水平的影响，为opc药物开发和应用于糖尿病及其并发症的防治提供科学依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 主要试剂与仪器 opc:由葡萄籽和松树皮经红酒萃取，美国greensboro公司产品;链脲佐菌素(streptozotocin，stz)：美国sigma公司;accuchek active型血糖仪及血糖测试条：德国roche诊断有限公司;modular pp全自动生化分析仪及酶法检测配套试剂盒，包括总胆固醇(tc)检测试剂盒(chodpap法)、甘油三酯(tg)检测试剂盒(gpopap法)、高密度脂蛋白胆固醇(hdlc)及低密度脂蛋白胆固醇(ldlc)检测试剂盒(酶直接法)：德国roche公司;兔抗小鼠胰岛素多克隆抗体(antiinsulin)、过氧化物酶标记的链霉卵白素(streptavidin peroxidase，sp)试剂盒：北京博奥森生物技术有限公司;组织切片机、显微照相装置：德国莱卡公司。

　　1.1.2 动物 健康雄性昆明小鼠60只，体质量26～30g，由长江大学医学院实验动物中心提供。1.2 方法

　　1.2.1 糖尿病模型制作[4，5] 用ph4.4的0.1mol/l枸橼酸钠缓冲液新鲜配制stz溶液，按45mg/kg每日给50只小鼠行腹腔注射，连续5d。注射后小鼠自由饮水、进食标准饲料;每周1次采尾静脉血测定小鼠全血血糖值，空腹血糖值在12mmol/l以上的小鼠为糖尿病模型。

　　1.2.2 动物分组与opc给药 stz末次注射后2周，取40只糖尿病小鼠分为4组，每组10只，每天上午禁食2h后灌胃给药：①opc低剂量组：opc粉剂溶于蒸馏水按50mg/kg体质量给药;②opc中剂量组：opc 100mg/kg体质量;③opc高剂量组：opc 150mg/kg体质量;④糖尿病模型对照组和作为⑤组的正常对照小鼠(10只)灌胃等容量蒸馏水。

　　1.2.3 主要观测指标 试验过程中注意观察动物饮水量、进食量、尿量和体质量的变化及糖尿病症状表现;4周末小鼠空腹摘眼球取血，3000rmp/min离心分离血清，按试剂盒要求操作，检测血清tc、tg、hdlc、ldlc含量;处死小鼠取胰腺标本，4%多聚甲醛固定、石蜡包埋切片、脱蜡水化、微波抗原修复后，按sp试剂盒要求进行免疫组织化学染色(抗小鼠胰岛素抗体工作浓度为1∶300)、dab显色、苏木素复染、脱水、透明，中性树脂封片，最后显微镜观察、拍照。

　　1.3 统计学处理 计量实验数据以±s表示，组间差异性检验用spss11.5统计软件进行单因素方差分析。p<0.05为有统计学差异。

　　2 结 果

　　2.1 opc对dm小鼠症状的影响 试验过程中观察到t1dm模型组多饮、多食、多尿、体质量减轻等糖尿病症状典型并在试验过程中加重，而opc各组以上症状明显较轻且体质量仍有缓慢增加，表明opc具有缓解和改善糖尿病症状的作用。

　　2.2 opc对实验动物血脂的影响 糖尿病模型组表现为高血脂症，与正常组相比，血清tc、tg、ldlc显著增高(p< 0.01，p <0.05)，hdlc降低但不具统计学差异(p>0.05);与dm组比，opc组血清tc、tg、ldlc降低(p< 0.01，p<0.05)，表明opc主要降低tc、tg、ldlc，并以中、高剂量作用较大，但对hdlc的影响不明显，见表1。 表1 opc对糖尿病小鼠血脂含量的影响注：与正常对照组比较，*p<0.05，**p<0.01;与模型对照组比较，△p<0.01，△△p<0.01。

　　2.3 胰腺免疫组织化学染色结果 显微镜下可见正常小鼠胰腺组织胰岛数目多，呈圆形或椭圆型，结构完整;t1dm组胰岛数目明显减少，形态结构改变甚至被破坏， 有不同程度的淋巴细胞浸润。(第89页彩色图版ⅰ之)图1示正常对照组胰岛结构完整，胰岛细胞呈深棕色，着色部位在胞浆，胰岛素高表达;(第89页彩色图版ⅰ之)图2示模型组胰岛结构破坏，多量淋巴细胞浸润，仅少量胰岛细胞着色，胰岛素表达明显减少;(第89页彩色图版ⅰ之)图3示opc组，胰岛结构相对完整，胰岛细胞着色浅但着色细胞明显多见，淋巴细胞浸润较少，表明由stz诱导的自身免疫反应有所减轻，胰岛素分泌增加。

　　3 讨 论

　　stz小剂量多次注射stz选择性破坏动物胰岛细胞， 使之释放自身抗原成分刺激机体免疫系统产生自身抗体，胰岛b细胞进行性损害，胰岛素合成受阻、缺乏， 导致自身免疫性1型糖尿病的发生。而胰岛素不足，脂肪组织摄取葡萄糖及从血中移出甘油三酯减少，脂肪合成减少;脂蛋白酯酶活性低下，血游离脂肪酸和甘油三酯浓度升高则引起糖尿病的脂代谢紊乱[6] 。本试验表明，糖尿病小鼠脂代谢明显异常，tc、tg和ldlc显著升高，hdlc也有降低;opc早期用药能显著降低糖尿病小鼠血中甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇，改善糖尿病小鼠的脂代谢异常。其作用机理可能是通过对糖尿病小鼠胰岛β细胞的修复作用，促进胰岛素分泌功能，从而起到减轻小剂量多次注射stz所诱导的胰岛自身免疫反应、调节脂代谢和改善症状的作用。由于脂代谢紊乱是糖尿病肾病和心血管病等并发症的高危因素，纠正糖脂代谢紊乱是减少和治疗糖尿病并发症的关键[1] ，因此opc的以上作用在减少糖尿病并发症，尤其是心血管并发症方面可能具有重要意义。opc目前主要用于保健品，但其作为降糖[7]、降脂及免疫调节的抗氧化药物用途方面的研究应用正在引起关注。鉴于我国的opc资源丰富，而糖尿病及并发症发生率高，我们的研究对opc的进一步开发和应用于防治糖尿病及其并发症方面具有积极作用。

【参考文献】
1]钱荣立.糖尿病与血脂异常[j].中国糖尿病杂志，2002，10(2)：125126.

　　[2]张桂君，陆明海.一种有广泛生物活性的黄酮——寡聚原花青素(opc)[j]. 中国医药技术与市场，2006，6(2)：4244.

　　[3]高羽，董志.原花青素的药理学研究现状[j].中国中药杂志，2009，34(6)：651655.

　　[4]丁学屏. 中西医结合糖尿病学[m].北京：人民卫生出版社，2004：472473.

　　[5]emanuela a， eleonora p， roberto g，et sion of reg and cytokeratin 20 during ductal cell differentiation and proliferation in a mouse model of autoimmune diabetes[j]. european journal of endocrinology，1999，141：644652.

　　[6]叶任高.内科学[m]. 第5版. 北京：人民卫生出版社，2001：798805.

　　[7]涂献玉，王文英，邓德明，等. 低聚原花青素对stz糖尿病小鼠血糖水平的影响[j]. 长江大学学报(自科版)医学卷，2006，3(4)：247249.

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