地塞米松小鼠(大剂量地塞米松抑制试验用于鉴别什么)

作者：杨威，赵伟杰 孙玉明，曾琳玲，肖百全，黄远铿

【摘要】 目的 探讨知母提取物对地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的影响。方法 通过建立地塞米松诱发的大小鼠胃肠道机能紊乱动物模型，检测大鼠胃液量、胃液ph值、胃蛋白酶活力及胃壁结合黏液量和小鼠肠推进率及胃内色素残留率等指标考察知母提取物的药理作用。结果 知母提取物能显著减轻地塞米松所致小鼠胃排空运动减缓，使给予地塞米松造模的大鼠胃液ph值显著增加，胃蛋白酶活力明显降低，胃壁结合黏液量也有明显增加趋势。结论 知母提取物具有改善地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的作用。

【关键词】 知母提取物;地塞米松;胃肠机能紊乱

　　abstract:objective to investigate the protective effect of rhizoma anemarrhenae extract on the gastrointestinal dysfunction induced by dexamethasone (dxm) in rats and mice. methods the pathologic models of gastrointestinal dysfunction induced by dxm were established in rats and mice. the volume and ph value of gastric juice,the activity of pepsin,the volume of gastric barrier mucus were detected to evaluate the pharmacological effects of anemarrhenae extract in rats and mice. results dxm at 1.2 mg/kg for 8 days could increase the leve1of pepsin,and decrease the ph value of the gastric juice and the volume of gastric barrier mucus in rats. and the rate of intestinal propulsion and gastric emptying in mice could be reduced by administration of dxm at 1.0 mg/kg for 5 days. anemarrhenae extract could significantly improve the pathologic manifestation of rat and mouse models accordingly. conclusions the reproducible model of gastrointestinal dysfunction induced by dxm could be made successfully. anemarrhenae extract could obviously improve the gastrointestinal dysfunction induced by dxm in rats and mice.

　　key words:rhizoma anemarrhenae extract;dexamethasone;gastrointestinal dysfunction

　　 糖皮质激素是 治疗 内科许多疾病的常用药物之一，但长期、大剂量使用糖皮质激素可引起各种不良反应和并发症。糖皮质激素常见的不良反应，如在消化系统方面可致患者出现恶心、嗳气、腹胀、上腹疼痛等消化系统机能紊乱症状，严重者可出现溃疡[1]。中药知母在减轻糖皮质激素致胃肠机能紊乱的副作用方面的实验研究尚未见报道，本研究通过建立地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱模型(模型的建立另文发表)，探讨知母提取物对地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的改善作用。

　 　1 材料和仪器

　　1.1 药物与试剂

　　知母提取物,自制。地塞米松片,广东华南药业有限公司，批号：051201，规格：0.75 mg/片。阿利新蓝,serva产品，广州市博理生物科技有限公司分装。胃蛋白酶试剂盒,南京建成生物工程研究所。葡聚糖蓝2000,批号：17036001，规格：10 g/瓶，amersham biosciences公司。

　　1.2 动物

　　spf级sd大鼠、 spf级昆明种小鼠均购自广东省医学实验动物中心，生产许可证：scxk(粤)20030002。

　　1.3 主要仪器

　　bs400swei 电子 天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司;tu1901可见-紫外分光光度计，北京普析通用公司 ;bs224s电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司;318k高速冷冻离心机，美国sigma公司;phs2f数字ph计，上海精密学仪器有限公司。

　　 2 方法

　　2.1 知母提取物对地塞米松抑制小鼠胃肠道运动的影响[2]

　　72只spf级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量20～22 g。随机分为6组：(1)空白对照组;(2)地塞米松模型组;(3)知柏地黄丸组(3.75 g·kg-1);(4)知母提取物低剂量组(0.77 g·kg-1);(5)知母提取物中剂量组(2.31 g·kg-1);(6)知母提取物高剂量组(6.93 g·kg-1)。给药组每天按设定剂量ig给药1次，给药容积20 ml·kg-1;空白对照组、模型组均给予等量蒸馏水，连续5 d。从第1天给受试药后0.5 h灌胃地塞米松混悬液，空白对照组给予等量的1.0%cmcna，连续给5 d，末次给药前将动物禁食24 h。末次给药及给予地塞米松1 h(空白组除外)后每鼠灌胃给予2%葡聚糖蓝0.4 ml/只，20 min后处死动物，迅速剖腹取胃，沿胃大弯侧剪开，用4 ml去离子水将胃内容物充分洗出，离心取上清液，用紫外分光光度计在波长620 nm测吸光度a，测算胃内色素(葡聚糖蓝2000)残留量(以空白对照组均值为100%，其余各组均值与空白对照组均值之百分比为相对胃内色素残留率)。胃内色素相对残留率(%)=胃洗液a值/正常对照组a值×100%。同时迅速剪取小肠， 自然 拉直，量取幽门括约肌至色素最前沿的距离作为色素在小肠内推进距离;从幽门括约肌至回盲部的总长度作为小肠总长度， 计算 小肠推进率(%)。肠推进率(%)=幽门至色素距离(cm)/幽门至回盲部距离(cm)×100%。

　2.2 知母提取物抑制地塞米松对大鼠胃液、胃蛋白酶、胃酸、胃壁结合黏液量的影响

　　sd大鼠84只，雌雄各半，体质量150～180 g，随机分为6组：(1)空白对照组;(2)地塞米松模型组;(3)知柏地黄丸组(2.40 g·kg-1);(4)知母提取物低剂量组(0.54 g·kg-1);(5)知母提取物中剂量组(1.62 g·kg-1);(6)知母提取物高剂量组(4.86 g·kg-1)。给药组每天按设定剂量ig给药1次，给药容积10 ml·kg-1;空白对照组、模型组均给予等量蒸馏水，连续8 d 。从第1天给受试药后0.5 h灌胃地塞米松混悬液(用1.0%cmcna配制)，给药容积10 ml·kg-1，正常组给予等量的1.0%cmcna，连续8 d，于末次给药前动物禁食24 h后麻醉动物，开腹结扎幽门后[5]，立即由十二指肠再给药1次，然后缝合腹壁。术后6 h，处死动物，开腹结扎贲门，摘取全胃，量取胃液体积。用数字ph计测胃内容物ph值后，离心取上清胃液，检测胃蛋白酶活力[4]，方法参照胃蛋白酶活力测试盒说明书。另取出鼠胃，滤纸吸干表面水分，沿胃大弯剪开鼠胃，将胃黏膜外翻，用生理盐水清洗2次，再将胃浸泡于30 ml阿利新蓝溶液中，于25 ℃温化孵育2 h后取出鼠胃，反应液离心后取上清液于分光光度计615 nm波长处比色测定吸光度，按下式 计算 ：胃壁黏液结合黏液量[3]= 6×(1-实测吸光度/标准管吸光度)。

　　2.3 统计方法

　　所有数据均输入excel 2003统计软件进行统计处理，各组计量数据均用(±s)表示，采用t检验，以p<0.05为差异有显著性。

　　3 结果

　　3.1 知母提取物对地塞米松抑制小鼠胃肠道运动的影响

　　结果见表1。与空白对照组相比，模型组小鼠肠推进率明显降低，胃相对残留率明显增加(p<0.01);与模型组比较，知柏地黄丸、知母提取物高、中、低剂量组胃相对残留率明显降低(p<0.01)，低于空白对照组，肠推进率无明显改变。

　　3.2 知母提取物抑制地塞米松对大鼠胃液、胃蛋白酶、胃酸、胃壁结合黏液量的影响

　　结果见表2。与空白组相比，模型组胃液ph值、胃壁结合黏液量明显减少(p<0.01)，胃蛋白酶活力明显升高(p<0.01)，胃液量无明显改变;与模型对照组相比，知柏地黄丸组以及知母提取物高、中剂量组胃液ph值明显升高(p<0.05或0.01)，知母提取物高、中剂量组胃蛋白酶活力明显降低(p<0.01),知母提取物高、中剂量组胃壁结合黏液量有增加的趋势;与空白组相比，知柏地黄丸组以及知母提取物高、中剂量组胃液ph值和胃蛋白酶活力值均相近。表1 知母提取物对地塞米松抑制小鼠胃肠道运动的影响表2 知母提取物抑制地塞米松对大鼠胃液、胃酸、胃蛋白酶及胃壁结合黏液量的影响

　 　4 讨论

　　 文献 报道，长期超生理剂量或大剂量使用糖皮质激素常见食后恶心、嗳气、腹胀、上腹疼痛等消化系统机能紊乱症状，严重者可出现溃疡、肠道出血及穿孔[1,6]。糖皮质激素诱发溃疡的机理是：①刺激胃酸和胃蛋白酶的分泌，胃酸分泌增多;②抑制黏液的分泌，并使胃壁各层变薄甚至萎缩;③阻碍组织修复。动物实验表明，糖皮质激素能增加胃酸分泌，减少胃黏液量，增加胃泌素分泌和使胃壁细胞增生，并延缓溃疡的愈合[5]。本研究结果表明，知母提取物各剂量组均能显著减轻地塞米松所致小鼠胃排空运动减缓，但不能减轻地塞米松所致的小鼠肠推进运动减缓;与模型组相比，知母提取物高、中剂量组大鼠胃液ph值均显著增加，胃蛋白酶活力明显降低，且与空白组相近;对地塞米松引起的胃壁结合黏液量降低有明显的抑制趋势。提示知母提取物具有改善地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的作用，在减轻糖皮质激素致胃肠机能紊乱的副作用方面具有良好的应用开发前景，但其发挥此作用的有效部位或有效成分有待于进一步研究。研究结果还表明，其改善胃排空作用优于改善肠推进作用，具体原因有待于进一步研究。

【 参考 文献】
　[1] 黄炎.长期应用糖皮质激素的毒副作用[j].中华实用儿科杂志,2000,1:15-17.

　　[2] 黄伟锋,欧阳守,林燕飞,等，槲皮素对胃肠运动的影响及其机制[j]. 世界华人消化杂志，2009,17(18):1815-1820.

　　[3] corne s j,mprrissey s m,woods r j.a method of quantitative estimation of gastric barrier mucus[j].physiol，1974，242(2)：116-117.

　　[4] 叶震世.胃黏膜屏障与胃黏膜保护的研究进展[j].世界华人消化杂志，2005,11:2478-2581.

　　[5] richardson c t. pathogenetic factors in peptic ulcer disease[j]. am j med ,1985,79(2c):1-7.

　　[6] 吴斌.糖皮质激素副作用的中医药研究进展[j]. 时珍国医国药,2010,25(3):719-721.