异黄酮苷元滴丸和片剂在大鼠体内的相对生物利

作者：杨红，董海松 罗思婧 任冬冬 周天鸿

【摘要】 目的 研究异黄酮苷元滴丸和片剂的药动学及相对生物利用度。方法 以sd大鼠为实验动物，采用高效液相色谱法测定异黄酮苷元滴丸和片剂单剂量灌胃给药后大鼠的血药浓度变化。用3p97软件进行药代动力学数据处理， 计算 分析药代动力学参数和相对生物利用度。结果 异黄酮苷元滴丸：auc为46.30 μg·min·ml-1，cmax为0.89 μg·ml-1，tmax为18.03 min;片剂：auc为36.01 μg·min·ml-1，cmax为0.41 μg·ml-1，tmax为31.43 min，滴丸相对于片剂的相对生物利用度为128%。结论 异黄酮苷元滴丸、片剂均符合一室模型，滴丸较片剂具有较高的生物利用度。本研究为异黄酮苷元滴丸研制提供了一定的依据。

【关键词】 异黄酮苷元滴丸;异黄酮苷元片剂;高效液相色谱法;药代动力学;相对生物利用度

abstract:objective to investigate the pharmacokinetic and relative bioavailability of isoflavone aglycone dripping pills and tablets in healthy sd rats,and evaluate the pharmacokinetic effects of the two dosage forms of isoflavone aglycone. methods 36 sd rats were intragastrically administered with the suspension solution of isoflavone aglycone dripping pills and tablets at single dose,and changes in plasma concentration were determined by hplc. pharmacokinetic data were processed with 3p97 software and the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated. results for dripping pills of isoflavone aglycone:auc=46.30 μg·min·ml-1,cmax=0.89 μg·ml-1,tmax=18.03 min; and for tablets of isoflavone aglycone:auc=36.01 μg·min·ml-1，cmax=0.41 μg·ml-1，tmax=31.43 min. the relative bioavailability of dripping pills and tablets was 128%. conclusion the pharmacokinetics of dripping pills and tablets of aglycone isoflavone were in accordance with single compartment model，and the relative bioavailability of dripping pills of aglycone isoflavone was higher.

　　key words:isoflavone aglycone drippping pills; isoflavone aglycone tablets; hplc; pharmacokinetics; relative bioavailability

　 异黄酮苷元(isoflavone aglycone)是一种来源于豆类植物的游离苷元，包括染料木素、黄豆苷元、黄豆黄素3种活性成分，其中染料木素的结构与雌二醇相似，且含量最高，生物活性最强[1]。异黄酮苷元是一种具有较强的抗氧化活性和神经保护作用的植物雌激素，在防治老年性痴呆和由于雌激素缺乏导致的骨质疏松等方面有良好的应用前景[2]。但异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低，影响了其在体内的生物活性。本实验通过考察自制异黄酮苷元滴丸[3]和片剂[4,5]的药代动力学特征，为异黄酮苷元滴丸的临床应用提供依据。

　　广东药学院学报 第25卷 第6期 杨红,等.异黄酮苷元滴丸和片剂在大鼠体内的相对生物利用度研究

1 材料与仪器

　　1.1 材料

　　异黄酮苷元滴丸和片剂是由本实验室从大豆中提取制备的游离苷元研制而成(平均丸重25.03 mg·丸-1，染料木素含量为133.2 mg·g-1;平均片重453.84 mg·片-1，染料木素含量为5.40 mg·g-1);染料木素对照品(上海同田生化技术有限公司);无水甲醇(分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司);磷酸(分析纯,沈阳 经济 技术开发区试剂厂);甲醇(色谱纯,tedia公司);异黄酮苷元滴丸灌胃液(精确称取0.05 g滴丸细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);异黄酮苷元片剂灌胃液(精确称取1.234 g片剂细粉，0.5%羧甲基纤维素钠定容到100 ml，得到含染料木素66.6 μg·ml-1的灌胃液);其余试剂均为分析纯。

　　1.2 动物

　　sd大鼠36只，鼠龄8～12周，体质量(200±10)g，广州中医药大学实验动物中心，许可证号：scxk(粤)20080020，粤监证字2008a002。

　　1.3 仪器

　　p680a高效液相色谱仪(美国戴安公司);re52cs旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);低sh2d循环水试真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);数显恒温水浴锅(江苏省宏华仪器厂);xw80型旋涡混合器(上海第一医学院仪器厂);高速离心机(日本日立公司)。

　　 2 实验方法

　　2.1 对照品溶液的制备

　　取空白血浆6份,分别精密加入染料木素对照品制得质量浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、1.60 μg·ml-1的对照品溶液，4 ℃保存备用。

　　2.2 色谱条件

　　参照 文献 [6,7]进行改进：色谱柱为diamonsil c18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);柱温为25 ℃;流动相为甲醇0.3%磷酸溶液(体积比48∶52);流速为0.7 ml·min-1;测定波长为254 nm;进样量为20 μl。

　　2.3 血浆样品预处理

　　取血浆1 ml， 加入1 ml乙酸乙酯， 涡旋振荡

　　2 min，3 000 r·min-1离心5 min，移取上层有机相于另一试管中;将下层溶液重复上述步骤，合并有机相溶液，通风橱中挥干，残留物加无水甲醇溶解，0.45 μm微孔滤膜过滤，用无水甲醇定容于2 ml容量瓶，得血浆样品溶液。

　　2.4 方法专属性

　　在“2.2”项色谱条件下，测得空白血浆、对照品血浆(含染料木素)、样品血浆(含异黄酮苷元)的色谱图见图1。从图1可见，血浆中的杂质不干扰测定。

2.5 标准曲线[8]

　　取“2.1”项下的对照品溶液，按“2.3”项下处理并进样测定，以染料木素溶液的质量浓度为横坐标,相对应的染料木素的峰面积为纵坐标,用最小二乘法进行线性回归 计算 ，得回归方程为y=3272.06 x-1.87，r=0.999 9。表明染料木素对照品的质量浓度在0.05～1.60 μg·ml-1(n=6)范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.6 精密度试验

　　取空白血浆1.0 ml，按“2.3”项下处理，制得高、中、低3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的样品溶液，分别于1 d内和3 d内连续进样5次测定，并计算rsd值，结果见表1。表1 精密度试验结果

　　2.7 相对回收率试验

　　精密吸取血浆样品3份，按“2.3”项下操作处理，得血浆样品溶液并根据标准曲线计算样品溶液浓度，将所得浓度与实际浓度的比值即相对回收率，见表2。表2 相对回收率结果

　　2.8 稳定性考察

　　取“2.1”项下的3种浓度(1.60、0.80、0.40 μg·ml-1)的溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样分析，结果显示溶液中染料木素的rsd为0.83%，表明样品溶液在4 ℃避光条件下12 h内稳定。

　　2.9 血浆样品测定

　　取sd大鼠36只，随机分成2组，隔夜禁食，分别灌胃给予异黄酮苷元滴丸灌胃液或异黄酮苷元片剂灌胃液(2 ml·只-1),于灌胃后0、5、10、15、30、45、60、75、90、105、120、150 min对大鼠进行眼眶取血(约1.5 ml·只-1)， 置肝素试管中抗凝， 5 000

　　r·min-1离心5 min，分离上清液，得血浆样品。按“2.3”项下方法处理得到血浆样品溶液并进行测定，利用回归方程求出血药浓度。

　 　3 结 果

　　3.1 血药浓度测定结果

　　按不同时间点求出平均血药浓度，并绘制血药浓度-时间曲线，见图2、3。由图可见：15 min时滴丸的血药浓度为0.706 μg·ml-1，片剂的血药浓度为0.405 μg·ml-1，相比其他时间点，此采血点的血药浓度最高。

　　3.2 药动学参数

　　血药浓度数据经药代动力学软件3p87拟合处理后，药动学参数结果见表3。从表3可见：异黄酮苷元滴丸和片剂均符合一室模型;滴丸和片剂的主要药代动力学参数具有明显的差别，滴丸在18.03 min时达到血药浓度峰值0.89 μg·ml-1，而片剂出现2个峰值，分别在15 min和75 min，血药浓度峰值为0.41 μg·ml-1和0.365 μg·ml-1;滴丸的auc为46.30 μg·min·ml-1，而片剂的为36.01 μg·min·ml-1，滴丸的相对生物利用度约为片剂的128%。表3 异黄酮苷元滴丸和片剂药代动力学参数

　 　4 讨 论

　　异黄酮苷元具有苯并吡喃酮结构，有较强的紫外吸收，3种活性成分均难溶于水[9]，影响了其在体内的吸收利用。本实验对自制异黄酮苷元滴丸和片剂的药代动力学特征和生物利用度考察，结果显示滴丸的血浆药物浓度-时间曲线为单峰，而片剂表现为双峰，说明片剂可能在大鼠体内存在肝肠循环;异黄酮苷元滴丸生物利用度为片剂的1.28倍，说明滴丸可显著改善和提高异黄酮苷元在体内吸收和代谢，在一定程度上解决了异黄酮苷元难溶于水，生物利用度低的问题。本文结果为进一步的体内研究提供了依据。

【 参考 文献 】
　　[1] 张磊，金桂芳，习志刚，等.异黄酮苷元快速检测方法的研究[j].广东药学院学报，2008，24(1)：30-32.

　　[2] 孙纪元，缪珊，李纪鹏，等. 染料木素对雌激素缺乏诱发的大鼠骨质疏松症的作用研究[j].