肺癌患者的检测方法(肺癌患者的检测报告)

【关键词】 肺癌

　　sakaguchi等自1995年报道cd4+cd25+调节性t细胞（tegulatory t cells，treg）是一群具有免疫调节作用的细胞群以来，近几年cd4+cd25+treg在肿瘤、免疫性疾病中的作用已有研究。我们采用流式细胞术，对42例肺癌患者外周血淋巴细胞中cd4+cd25+treg进行检测，研究肺癌患者cd4+cd25+treg的变化及其与肿瘤生物学行为的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 标本来源 42例肺癌患者均为我院2005年4～12月的初诊手术病人，男30例，女12例，年龄39～80岁，平均57.8岁。其中鳞癌20例，腺癌16例，肺小细胞癌6例；根据手术中淋巴结转移与否，淋巴结转移25例，未转移17例；临床分期：ⅰ期18例，ⅱ期16例，ⅲ期8例。30例正常对照组为我院经体格检查并且生化及免疫指标均正常的健康体检者，其中男17例，女13例，年龄25～70岁，平均54.2岁。

　　1.1.2 仪器与试剂 facs calibur流式细胞仪、单色cd25pe/cd4fitc、cd3pe/cd56+16fitc(nk细胞)及作同型对照的羊抗鼠iggγ1γ2fitc/pe单克隆抗体、溶血素均为美国bd公司产品。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集 所有标本均在受检者清晨空腹下，用一次性真空管采集肘静脉血，以109 mmol/l枸椽酸钠作1∶9抗凝，4小时内检测完毕。

　　1.2.2 检测方法 取3支专用试管，加入抗凝全血100 μl后分别加入cd4fitc/cd25pe、cd3pe/cd56+16fitc及阴性对照单克隆抗体20 μl，室温避光放置30分钟后加入溶血剂2.0 ml，10分钟后1 500 r/min离心5分钟，弃上清液，加入pbs 0.5 ml，用流式细胞仪的cell quest软件获取和分析。

　　1.2.3 统计学方法 用spss 11.5软件包进行统计分析，各组数据用x±s表示，组间比较用t检验或单因素方差分析（oneway anova）。

　　2 结果

　　2.1 肺癌患者与对照组外周血cd4+cd25+treg检测结果的比较 肺癌组cd4+cd25+treg明显高于正常对照组（p<0.01），cd4+cd25-细胞和cd56+16+细胞（nk细胞）则明显低于正常对照组（p<0.01和p<0.05），结果见表1。

　　2.2 肺癌淋巴结转移组与未转移组外周血cd4+cd25+treg检测结果的比较 转移组cd4+cd25+细胞明显高于未转移组（p<0.01），而cd56+16+细胞（nk细胞）明显低于未转移组（p<0.05），cd4+cd25-细胞则有减低趋势，但无统计学意义，结果见表2。

　　表1 肺癌患者与对照组外周血t细胞cd4、cd25检测结果（略）

　　tab.1 the measurement results of t cell cd4,cd25 in peripheral blood in patients with lung cancer and control donors

　　note:compared with control donors,1) p<0.05,2) p<0.01.

　　表2 肺癌患者淋巴结转移组与未转移组外周血t细胞cd4、cd25检测结果（略）

　　tab.2 the measurement results of t cell cd4,cd25 in peripheral blood in patients with lung cancer with lymph nodes metastasis group and no metastasis group

　　note:compared with the no metastasis group,1) p<0.05,2) p<0.01.

　　表3 临床分期不同的肺癌患者外周血t细胞cd4、cd25的检测结果（略）

　　tab.3 the measurement results of t cell cd4,cd25 in peripheral blood in patients with lung cancer in different clinical grading

　　note:compared with ⅱ period and ⅲ period,1) p<0.05;compared with ⅰ period and ⅱ period,2) p<0.05.

　　2.3 临床分期不同的肺癌患者外周血t细胞cd4、cd25检测结果的比较 肺癌患者ⅰ期cd4+cd25+细胞明显高于ⅱ期和ⅲ期（p<0.05），而ⅲ期的cd56+16+细胞（nk细胞）明显低于ⅰ期和ⅱ期（p<0.05），而cd4+cd25-细胞随病程的进展逐渐减低，但无统计学意义，结果见表3。

　　3 讨论

　　cd4+cd25+treg具有无反应性和免疫抑制性两大功能特征，无反应性是指它们对il2、特异性抗原、抗原提呈细胞（apc）的刺激呈无反应状态；免疫抑制性是指它能抑制cd4+和cd8+t细胞的il2转录与表达，从而干扰其活化与增殖，它还可以抑制cd4+cd25-t细胞对il2的反应性，干扰cd4+th细胞对cd8+t细胞的辅助作用,目前对cd4+cd25+treg的效应机制还不十分明确。在体内cd4+cd25+treg可以抑制识别自身肿瘤细胞的肿瘤效应细胞的发育和活化，去除cd4+cd25+treg可以消除对固有肿瘤的免疫无应答性,引起肿瘤特异性和非特异性效应细胞的自然发育［1］。sasada等［2］在149例胃癌患者及7例已出现腹膜转移的胃癌患者中检测t淋巴细胞尤其是cd4+cd25+t细胞的数量及表型，结果发现，与健康志愿者相比，胃癌患者存在较高水平的cd4+cd25+t细胞，以及较少数量的cd4+cd25-t细胞，且发现有腹膜转移者cd4+cd25+t细胞比例最高，cd4+cd25+t细胞水平越高，预后越差。本文对肺癌患者cd4+cd25+treg检测结果也与此相似，肺癌患者的cd4+cd25+treg明显高于正常人，随着病程的进展，其cd4+cd25+treg也逐渐增高；有淋巴结转移者明显高于未转移者。肿瘤组织发生淋巴结转移后，癌细胞分泌的某种物质可能会促使肿瘤患者体内cd4+cd25+t调节性细胞比例升高，从而导致肿瘤患者免疫功能受到抑制［3］。机体抗肿瘤免疫反应以细胞免疫为主，t淋巴细胞亚群对机体的免疫应答调控和维持免疫稳定起重要作用。cd4+cd25+treg激活后，在机体对抗肿瘤时发挥负向调节作用［2］。最近发现，cd4+cd25+t细胞不仅能够抑制cd8+t细胞，还可抑制cd4+t细胞的抗肿瘤活性，在去除或降低cd4+cd25+t细胞的情况下联合使用th的抗原决定簇，可显著增强抗瘤活性［4］。本文的检测结果发现，肺癌患者在cd4+cd25+treg细胞增高的同时，有nk细胞的明显减少，且随着病程的进展，cd4+cd25+treg细胞逐渐增高，而nk细胞逐渐减少。这是否与cd4+cd25+treg对nk细胞也同样有抑制作用有关，则有待于进一步的研究。总之，cd4+cd25+调节性t细胞增高可以反应肿瘤患者免疫系统存在抑制状态，并与病程和淋巴结转移状况有关。设法降低肿瘤患者体内的cd4+cd25+调节性t细胞，减少对各种淋巴活性细胞的免疫抑制可为抗肿瘤免疫提供新的治疗途径。

【参考文献】
　　1 奚桂林.cd4+cd25+调节性t细胞研究进展 ［j］.国外医学免疫学分册，2004；27(3)：141.

　　2 sasada t，kimura m，yoshida y et al. cd4+cd25+regulatory t cells in patients with gastrointestinal malignancies: possible involvement of regulatory t cells in disease progression ［j］.cancer，2003；98(5):10891099.

　　3 李 晓，陈怀增，谢 幸 et al. 卵巢癌患者cd4+cd25+t调节性细胞比例增高的可能机制 ［j］.中华微生物学和免疫学杂志，2004；24（7）：538539.

　　4 casares n，arribillaga l，sarobe p et al. cd4+/cd25+regulatory cells inhibit activation of tumorprimed cd4+t cells with ifngammadependent antiangiogenic activity，as well as longlasting tumor immunity elicited by peptide vaccination ［j］.j immunol，2003；171(11):59315939.

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