【关键词】 龙血竭;龙血素a;高效液相色谱法;大鼠;药动学
【摘要】 目的 考察龙血竭中龙血素a在大鼠体内的药动学行为。方法 按100 g大鼠给予龙血竭250 mg灌胃给药,测定不同时间点的血药浓度,并以3p97软件计算其药动学参数。结果 龙血素a 的ka为(146±0.19) h-1,t1/2(ka)为(0.48±0.06) h,t1/2(k)为(2.59±0.67) h,tmax为(2.00±0.55) h,cmax为(1.13±0.24) μg·ml-1,auc为(2.84±0.68) μg·h·ml-1。结论 龙血素a在大鼠体内符合线性动力学一室开放模型,吸收较快。
【关键词】 龙血竭;龙血素a;高效液相色谱法;大鼠;药动学
abstract:objectiveto study on pharmacokinetics of loureirin a in s the blood samples were collected at a series of time points after an oral administration of dragon′s blood to rats (2.5 g·kg-1),and were analyzed by cokinetic parameters were valuated by 3p97 software. results pharmacokinetic parameters of loureirin a were as follows:ka (1.46±0.19) h-1,t1/2(ka) (0.48±006) h,t1/2(k) (2.59±0.67) h,tmax (2.00±0.55) h,cmax (1.13±0.24) μg·ml-1,auc (2.84±0.68) μg·h·sion the results demonstrated that the pharmacokinetics of loureirin a was consistent with one-compartment model,which was absorbed and distributed rapidly in rats.
key words: dragon′s blood;loureirin a;hplc;pharmacokinetics
血竭(dragon′s blood) 又名麒麟竭,是传统名贵中药。国产血竭称龙血竭,具有祛瘀定痛、止血生肌的功效[1],被誉为“活血圣药”,临床应用广泛。龙血竭的主要成分为黄酮类化合物,其在治疗冠心病、脑梗死、心肌缺血、脑缺血损伤等方面有显著疗效[2-3]。龙血素a是龙血竭黄酮的主要成分之一,目前未见关于龙血素a体内药动学的文献报道。本文采用hplc法[4]测定龙血素a在大鼠体内的血药浓度,研究龙血素a在大鼠体内的药动学,为临床应用提供理论依据。
1仪器与材料
1.1动物
sd大鼠66只,体质量(250±20)g,雌雄兼备,由中山大学医学院动物中心提供,合格证号:(粤)2006a064。
1.2仪器
waters高效液相色谱仪:515 hplc泵,2487双波长吸收监测器,n-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);tdl80-2b台式离心机(上海安亭科学仪器厂);scq5201超声仪(上海超声波仪器厂);zh-2 blender涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。
1.3材料
广西产龙血竭(广西中医学院制药厂提供);龙血素a对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号:200402);乙腈、甲醇(色谱纯),乙酸乙酯、无水乙醇、冰醋酸(分析纯)。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:diamonsil c18(5 μm,250 mm×4.6 mm);保护柱:easyguard c18 replacement cartridgescat#6101;流动相:乙腈-体积分数1%冰醋酸(体积比35∶65);检测波长:280 nm;流速:1.2 ml·min-1,柱温:25 ℃;进样量:20 μl。
2.2血样的采集和处理
大鼠禁食(自由饮水)12 h后,按100 g大鼠给予龙血竭250 mg,灌胃给药。分别在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于颈动脉取血,置于用肝素预处理过的离心管中。取全血1 ml置离心管中,加入乙腈2 ml、乙酸乙酯1 ml,涡旋混合均匀,3 000 r·min-1离心10 min,取上清液,提取3次,合并上清液,50 ℃水浴挥干,于残渣中加入100 μl甲醇,超声处理使之溶解,12 000 r·min-1离心10 min,取上清液作为样品,注入高效液相色谱仪进行测定,记录色谱图与峰面积,采用外标法定量。
2.3方法学考察[3]
2.3.1龙血素a对照品贮备液的制备取龙血素a对照品,用甲醇配制成每1 ml约含100 μg的溶液,作为对照品贮备液。
2.3.2方法专属性取大鼠2只,实验前禁食12 h,自由饮水,1只做空白对照,1只按100 g给予龙血竭250 mg灌胃给药,给药2 h后取血样,按“2.2”项下方法操作测定。由图1可见,全血中的内源性物质不干扰龙血素a的测定,表明本方法有较好的专属性。[psd261;s*2〗a.空白血浆; b.空白血浆+对照品; c.样品图1 hplc图谱figure 1hplc chromatograms
2.3.3标准曲线与最低检测限取空白全血适量,精密加入龙血素a对照品储备液,配制质量浓度为0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·ml-1的系列浓度标准溶液,按“2.2”项下的方法,自“加乙腈2 ml、乙酸乙酯1 ml”起,依法操作,记录峰面积。以质量浓度(ρ)为横坐标,峰面积(a)为纵坐标进行回归,结果表明龙血素a的质量浓度在0.076~4.836 μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好,回归方程为:a=49679ρ+2784.3,r=0.998 3(n=7)。取标准曲线用溶液,逐步稀释至溶液中龙血素a的响应值约为基线噪音的3倍(s/n=3),记录色谱图,得出最低检测限(lod)为0.025 μg·ml-1。
2.3.4相对回收率与精密度精密量取对照品储备液,以空白全血分别配成高、中、低3种质量浓度(4.836、1.209、0.076 μg·ml-1)的样品溶液,按 “2.2” 项下的方法,自 “加乙腈2 ml、 乙酸乙酯 1 ml”起,依法操作。记录峰面积并代入标准曲线计算各样品浓度,计算相对回收率。结果表明,高、中、低3个质量浓度的样品的相对回收率均高于80%。见表1。
取以上高、中、低3个质量浓度的样品溶液于同一天内连续测定3次,计算日内rsd;每天测定3种浓度样品各1次,连续测定3 d,计算日间精密度rsd。结果日内和日间精密度rsd值均小于10%,表明该法精密度较好。见表1。
2.3.5样品稳定性精密量取对照品储备液,以空白全血配制质量浓度为0.076、0.605、1.209、2.418 μg·ml-1的样品,分别考察室温25 ℃放置0、4、12、24 h,-20 ℃冰箱放置24 h,-20 ℃下反复冻融3次的稳定性。结果各样品的rsd值均在2.76%~11.42%(n=6)之间,符合《中国药典》相关规定,表明样品稳定性较好。表1龙血素的回收率与精密度
2.4大鼠体内的药动学
取sd大鼠66只,禁食不禁水12 h后,按时间点随机分为11组,每个时间点6只,按100 g体质量给予龙血竭250 mg灌胃给药,采集不同时间点的血样,按“2.2”项下方法处理样品并测定龙血素a的浓度。
2.4.1血药浓度曲线按不同时间点求算平均血药质量浓度,并绘制血药质量浓度—时间曲线,见图2。由图可见,血药质量浓度达峰时间为(2.0±055)h,峰质量浓度为(1.13±0.24)μg·ml-1。[psd262;s*2〗图2 大鼠口服龙血竭(2.5 g·kg-1)后龙血素a平均血药质量浓度—时间曲线figure 2mean concentration-time curve of loureirin a in rats (n=6)
2.4.2药动学参数用药动学数据处理软件3p97对所测得数据进行拟合,所得药动学参数见表2。由表2可见,龙血素a在大鼠体内符合一室模型。
3讨论
3.1本文选取龙血竭主要成分之一的龙血素a作为指标成分,对龙血素a在大鼠体内的药动学情况进行了研究,为临床用药提供了依据。
3.2对sd大鼠一次性灌胃龙血竭(250 mg/100 g)后,取全血进行处理后测定血药浓度,根据aic(akaike′s information criterion)值最小原则,确定其符合一室吸收动力学模型,吸收半衰期为0.48 h;消除半衰期为2.59 h。从本文得到的药动学参数,并结合文献[6]数据推断,龙血竭口服后吸收较快,且迅速向体内各组织分布。表2大鼠口服龙血竭(2.5 g · kg-1)后药动学参数
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[m].北京:中国医药科技出版社,2010:96.
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[3] 方伟蓉,李运曼,邓嘉元.龙血竭总黄酮对动物心肌缺血的保护作用[j].中国临床药理学与治疗学,2005,10(9):1020-1024.
[4] 周晔,金描真,易军,等.含中药龙血竭的血清处理方法研究[j].广东药学院学报,2007,23(2):151-153.
[5] 李好枝.体内药物分析[m].北京:人民卫生出版社,2008.
[6] 孙晓博,金描真,李雪,等.龙血竭中龙血素a与龙血素b在大鼠体内的组织分布研究[j].广东药学院学报,2008,24(3):214-216.
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