甲硝唑对厌氧菌具有较强的抗菌作用(厌氧菌容易对替硝唑耐药吗)

【摘要】 目的：考察及评价噻克硝唑体内外对临床分离厌氧菌的抗菌活性。方法：采用琼脂二倍稀释法测定噻克硝唑、甲硝唑、替硝唑对临床分离的165株厌氧致病菌的mic。采用体内保护实验测定噻克硝唑的体内抗菌活性。结果：（1）体外实验证明，噻克硝唑具有较强的抗菌活性，其对革兰氏阴性厌氧菌抗菌活性略强于对革兰氏阳性厌氧菌的抗菌活性。（2）噻克硝唑体内试验也呈现较强的抗厌氧菌作用，略强于甲硝唑、替硝唑。结论：噻克硝唑具有广谱抗厌氧菌作用。

【关键词】 噻克硝唑；厌氧菌

噻克硝唑属5硝基咪唑类药物，于80年代在国外上市。主要用于治疗原虫感染，噻克硝唑与甲硝唑、替硝唑、奥硝唑相比，具有半衰期长，作用强，使用方便等特点［1］。本实验考察及评价噻克硝唑体内外对临床分离厌氧菌的抗菌活性。

1材料与方法

1.1实验材料

实验菌株：临床分离菌株：脆弱拟杆菌：20株；吉氏拟杆菌：20株；卵圆形拟杆菌：20株；普通类杆菌：20株；产黑拟杆菌：20株；牙龈卟唑单孢菌：10株；见核梭杆菌：10株；多形拟杆菌：10株；产气荚膜杆菌：5株；韦荣氏球菌：10株；中间型链球菌：10株；厌氧消化链球菌：10株。共165株质控菌：脆弱拟杆菌atcc 25285。由四川大学华西口腔医院赠送。以上菌株均为2004年于成都、北京地区临床医院普通外科、妇科及口腔临床分离的厌氧致病菌。实验动物：昆明种小白鼠，贰级动物（清洁级）体重：1822克，雌雄各半。实验药品：噻克硝唑（云南安水制药有限公司提供，生产批号：20040301）；甲硝唑（中国药品生物制品检定所提供，生产批号：10336）；替硝唑（四川科伦药业股份有限公司提供，生产批号：e04072215）。实验仪器：厌氧培养箱：浙江义乌冷冻机械厂生产，dy2型；电子分析天平；微量加样器：德国eppendorf,100μl,100μl。培养基：bhis琼脂培养基为上海生物制品研究所产品，用前加入vitk1hemin液和10％兔血；ts肉汤培养基（trypticsoy broth）：为difco公司商品，用前加入vitk1hemin液。

1.2实验方法［2］

1.2.1培养基的制备

将受试药用无菌蒸馏水溶解，并稀释至浓度为2560 mg/l的贮存液，在20℃保存备用。正式试验开始前用液体培养基将贮存药液配成二倍递减的系列药液，其浓度分别2560、1280、640、320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625和0.31、0.015、0.008 mg/l。

分别取2 ml不同浓度的实验药液加入冷却至48 ℃～50 ℃的bhis琼脂培养基18 ml，在灭菌小烧杯中混匀后倾注无菌平皿中。系列含药琼脂平皿的药物终浓度为256，128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.0625和0. 31、0.015、0.008 mg/l。

1.2.2mic测定

用接种菌环分别挑取48hbhis琼脂平皿上的细菌培养物接种入bhis液体培养基;用0.5mcfarland标准管校正菌液浓度，取0.01～0.03 ml（105cfu/ml），用多点接种器将上述受试菌液接种到含各种不同浓度的受试药物的平皿表面，置35 ℃厌氧箱（厌氧培养大气条件是h210%，n280%，co210%）培养48 h观察记录结果，未见细菌生长的药物最低浓度为其最低抑菌浓度（mic）。

1.2.3体内抗菌活性测定

试验菌液的制备实验前挑取受试菌落接种在厌氧菌分离琼脂平板，分别置入需氧、厌氧环境（h210%，n280%，co210%）培养（3～5℃，48h）。需氧对照不生长的菌株，厌氧环境生长良好的菌株用于本实验。挑取厌氧环境中生长良好的2～3个单菌落接种于厌氧菌液体培养基中，35℃培养24h，将该菌液用5％灭菌干酵母液适当稀释备用。

细菌感染菌量设定取上述厌氧环境生长良好的菌液，用5％灭菌干酵母液稀释（101、102、103、104），取健康小鼠20只，均分4组，每组5只鼠，分别腹腔注射上述系列稀释菌液，0.5ml/只，感染后观察并记录小鼠死亡（或存活数），致小鼠100％死亡的感染菌量为最小致死菌量（mld，minimal lethad dose），以该菌量作为体内感染实验的感染菌量。同时做活菌计数，求出实际细菌量（cfu·ml-1）。

给药剂量设计参考该类化合物体内实验文献数据，进行预试验，以求出0％和100％的有效剂量，在该剂量范围内，将受试药物设5～6个剂量组。组间距为1∶0.7。

体内保护实验首先按预试结果，将试药对照药物分别设5～6个剂量组，取健康昆明种小白鼠按体重、性别均匀分组，每组10只鼠（雌雄各半），分别腹腔感染1mld的受试菌液0.5 ml/鼠，感染后即刻再分别静脉注射受试药物，0.25 ml/10g-1体重，感染记录各组小鼠在24 h、48 h、72 h死亡数（或存活数），连续观察7天。

数据处理根据给药后7天后各给药组小鼠死亡数，按bliss法，运用ndst软件计算各受试药物半数有效剂量ed50及95％可信限。并进行统计学处理。

2实验结果

2.1噻克硝唑及其对照药对临床分离厌氧菌的mic值，见表1。表1 噻克硝唑及其对照药对临床分离165株厌氧菌的mic值

2.2 噻克硝唑及其对照药物对脆弱拟杆菌、厌氧消化链球菌感染小鼠的保护作用结果见表2、表3。 表2 噻克硝唑及其对照药对脆弱拟杆菌感染小鼠体内试验结果表3 噻克硝唑及其对照药对厌氧消化链球菌感染小鼠的体内试验结果

　　3 讨论

噻克硝唑是硝基咪唑类化合物，与试验对照组药物甲硝唑、替硝唑具有相似的化学结构，生理活性，临床上都可用于治疗厌氧菌感染引起的疾病［3］。噻克硝唑被动扩散进入微生物体内，通过5硝基基团的还原作用活化，由于其电子亲和力比还原的铁氧化还原蛋白大，从而妨碍正常的电子流。塞克硝唑对厌氧微生物有选择性毒性，并具有低的抗兼性和需氧微生物的活性。可以选择性地破坏靶细胞的dna，使dna断裂、dna双螺旋空间结构解体，从而导致合成蛋白质模板功能的丧失［1、4］。

本实验通过噻克硝唑、替硝唑和甲硝唑对165株临床分离菌株的mic50、mic90的研究表明，噻克硝唑对临床分离厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌具有较强抗菌作用。噻克硝唑对脆弱拟杆菌、吉氏拟杆菌、卵圆形拟杆菌、普通类杆菌、产黑拟杆菌、聚黑拟杆菌、具核梭菌、多形拟杆菌的mic50、mic90值分别为0.03～0.125mg/l和0.06～1.0mg/l。对产气荚膜杆菌、牙龈卟唑单孢菌抗菌作用强，mic50、mic90值分别是0.03mg/l和0.125mg/l；噻克硝唑对革兰阳性厌氧菌中的韦荣氏球菌、中间型链球菌、厌氧消化链球菌的mic50、mic90值分别是0.125～0.5mg/l和0.5～1.0mg/l。噻克硝唑对厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌作用略强于厌氧革兰阳性菌。

噻克硝唑对所试产气荚膜杆菌、脆弱拟杆菌、韦荣氏拟球菌的抗菌活性比甲硝唑、替硝唑强2～4倍；对吉氏拟杆菌、卵圆形拟杆菌、普通类杆菌和产黑类杆菌的抗菌活性略低于奥硝唑，对其余所试菌株的体外抗菌活性与甲硝唑、替硝唑基本相当。

由体内试验可知噻克硝唑体内也呈现较强的抗厌氧菌作用。噻克硝唑静脉给药对脆弱杆菌0406，厌氧消化链球菌0408感染小鼠均具有较好的体内保护作用，ed50分别是43.68mg/kg和55.06mg/kg。其体内抗厌氧菌活性略强于甲硝唑、替硝唑，但无显著性差异（p>0.05）。

该实验结果与以往实验研究报道结果基本一致［5-7］。上述结果提示，塞克硝唑具有广谱抗厌氧菌的作用。临床中常见由厌氧菌株和其他菌株引起的混合感染，可考虑使用使用5一硝基咪唑类药物，同时考虑与其他抗感染效果较好的抗生素联合使用。在5一硝基咪唑类药物中，塞克硝唑有效血药浓度维持时间可达17～29 h，明显优于替硝唑和甲硝唑，同时引起胃肠道不良反应少，因此，噻克硝唑在临床治疗厌氧菌及混合感染方面有较大的应用前景。

【参考文献】
1 赵燕、王少华．塞克硝唑的研究进展［j］中国临床医生.2006:34(7);21-22.

2 徐叔云，卞如濂，陈修主编．药理实验方法学[m]．第3版．北京：人民卫生出版社.

3 张立红，吴松. 塞克硝唑的药理及临床应用［j］.中国新药杂志．2002,11(10)：-765-766.

4 di prisco mc，jimenez jc，rodriguez n，et a1．clinical trial with secnidazole in a single dose in venezuelan children infected by giardia intestinalis［j］．invest clin.2000，41(3)：179-183．

5 陈海祥，王文君.塞克硝唑对厌氧菌抑菌效果研究［j］全科医学临床与教育.2005，3(4)：228-229.

6 徐颖颖，陈小青，阙连娣.塞克硝唑体内外抗厌氧菌效果的研究［j］.中国现代应用药学．2003，20(2)：91-94.

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