摘要:目的研究氨氯地平对肾性高血压大鼠心肌重构及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/激活蛋白－1(AP－1)信号通路的影响。方法将40只肾性高血压大鼠随机分为模型组(n=20)与实验组(n=20)，另选20只大鼠仅分离左肾动脉作为假手术组。实验组大鼠灌胃10mg·kg－1·d－1氨氯地平，每天1次，模型组与假手术组灌胃等量生理盐水，每天1次，连续干预10周。用超声诊断仪检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)、舒张末期室间隔厚度(IVSD)，并计算左心室射血分数(LVEF)与短轴缩短率(LVFS);用苏木精－伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理学变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)与心钠素(ANP)含量;用蛋白质印迹(WB)法检测心肌组织磷酸化p38MAPK(p－p38MAPK)、AP－1蛋白的表达水平。结果假手术组、模型组与实验组大鼠LVEDD分别为(0.56±0.08)，(0.89±0.06)，(0.63±0.03)mm;LVESD分别为(2.01±0.09)，(3.92±0.13)，(3.06±0.11)mm;LVPWD分别为(0.13±0.01)，(0.39±0.05)，(0.22±0.04)cm;IVSD分别为(0.15±0.01)，(0.34±0.03)，(0.23±0.02)cm;LVEF分别为(74.21±2.17)%，(56.83±1.84)%，(63.43±2.39)%;LVFS分别为(47.32±2.36)%，(24.11±1.61)%，(41.06±1.18)%。与假手术组比较，模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、IVSD与心肌组织AngⅡ、ALD、ANP含量及心肌组织p－p38MAPK、AP－1蛋白相对表达量均升高，且与模型组比较，实验组降低;而模型组LVEF与LVFS较假手术组降低，且与模型组比较，实验组升高(均P＜0.05)。结论氨氯地平可有效改善肾性高血压大鼠心肌重构，进而改善心脏功能，其作用机制可能与抑制心肌组织p38MAPK/AP－1通路的信号转导相关。
关键词:肾性高血压;氨氯地平;心肌重构;p38丝裂原活化蛋白激酶;激活
蛋白－1高血压是慢性肾病的危险因素，其中，左心室肥厚已被公认为是心血管疾病发生的独立危险因素［1］。目前高血压心脏病降压达标后持续存在的左心室重构仍是心力衰竭(HF)的高危因素［2］。氨氯地平是第3代钙离子拮抗药，其降压效果及对靶器官的保护作用已得到肯定，左旋氨氯地平可有效降压、减轻肾纤维化，对抗大鼠长期高盐饮食介导的肾毒性损害［3］。本研究探讨氨氯地平对肾性高血压大鼠心肌重构及P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)/激活蛋白－1(AP－1)信号通路的影响。
材料与方法
1材料
动物SPF级SD雄性大鼠，体重200～220g，购自河南省实验动物中心。动物生产许可证号:SCXK(豫)2017－0001。药品与试剂苯磺酸氨氯地平片，规格:每片5mg，批号:ck3049，批准文号:国药准字H10950224，杭州民生药业集团有限公司生产。苏木精－伊红(HE)染色液，北京中杉金桥生物技术公司生产;兔抗鼠P38MAPK抗体，美国SantaCruz公司生产;兔抗鼠AP－1抗体，美国CellSignalingTechnology公司生产。仪器vivid7超声诊断仪，美国GE公司产品;MutiskanGo酶标仪，美国ThermoFisher公司产品;DMLB2光学显微镜，德国Leica公司产品;ImageJ图像处理系统，美国NIH公司产品。
2实验方法
2.1模型建立［4］
3%戊巴比妥钠(30mg·kg－1)麻醉大鼠，分离左肾动脉后放置银夹(内径为0.2mm)并打结;假手术组同上，但不放置银夹。术后4周，若大鼠收缩压≥160mmHg，提示造模成功。
2.2动物分组与给药方法
将40只肾性高血压大鼠随机分为模型组(n=20)与实验组(n=20)，另选20只大鼠仅分离左肾动脉作为假手术组。实验组大鼠灌胃10mg·kg－1·d－1氨氯地平，每天1次，模型组与假手术组灌胃等量生理盐水，每天1次，连续干预10周。
2.3用超声诊断仪检测心功能指标
［5］末次干预后，测量左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)、舒张末期室间隔厚度(IVSD)，用超声诊断仪对其行超声心动图检查，并计算左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS)。LVEF=［左心室舒张末容积(EDV)－左心室收缩末容积(ES)］/EDV×100%;LVFS=(LVEDD－LVESD)/LVEDD×100%。
2.4用苏木精－伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化
［6］超声心动图检测后，过量麻醉法处死大鼠，解剖、采集各组大鼠心脏组织，固定后经脱水、包埋、切片(4μm)等制作心肌组织病理切片，进行HE染色，用光学显微镜观察心肌组织病理学变化。
2.5用蛋白质印迹(Wb)法检测心肌组织p－p38MAPK、AP－1蛋白的表达水平
［7］取液氮中保存的心肌组织100mg，加入裂解液研磨均匀并充分裂解，4℃下以1.4×104r·min－1离心10min，取上清液，BCA法测定蛋白浓度，按常规方法进行凝胶电泳分离，转膜、封闭;分别加入一抗，4℃孵育过夜;加入二抗。显影后，用ImageJ图像处理系统分析蛋白条带灰度值，以β－actin为内参，并进行半定量分析。2.6用ELISA法检测心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)与心钠素(ANP)含量［8］心肌组织采集同2.4，取心肌组织100mg研磨制备匀浆，以3000r·min－1离心15min，取上清液，用ELISA法检测心肌组织AngⅡ，ALD和ANP含量。
3统计学处理
用SPSS21.0软件进行统计分析。计量资料用x珋±s表示，符合正态分布且方差齐时，2组间比较Dunnett’st检验;反之用秩和检验，多组间比较用单因素方差分析。
结果
1各组大鼠心功能指标比较
与假手术组比较，模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD与IVSD均明显升高，且实验组低于模型组;而模型组LVEF与LVFS低于假手术组，与模型组比较，实验组升高(均P＜0.05)，见表1。
2各组大鼠心肌组织病理学变化
假手术组大鼠心肌组织结构正常，心肌细胞形态规则;模型组大鼠心肌细胞核深染、排列紊乱，且部分心肌细胞水肿、肥大，且伴有大量炎性细胞浸润;实验组大鼠心肌细胞形态趋于正常，心肌组织病变较模型组明显改善，见图1。
3各组大鼠心肌组织AngⅡ、ALD与ANP含量比较
与假手术组比较，模型组大鼠心肌组织AngⅡ、ALD与ANP含量均显著升高，而实验组低于模型组(均P＜0.05)，见表2。
4各组大鼠心肌组织p－p38MAPK、AP－1蛋白的表达水平
p－p38MAPK蛋白在假手术组、模型组与实验组大鼠心肌组织中的相对表达量分别为0.20±0.07，0.94±0.06，0.36±0.10;AP－1蛋白相对表达量分别为0.31±0.12，0.98±0.02，0.42±0.11。模型组大鼠心肌组织p－p38MAPK、AP－1蛋白相对表达量均高于假手术组，而与模型组比较，实验组降低(均P＜0.05)，见图2.本研究中，实验组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD与IVSD及心肌组织AngⅡ，ALD、ANP含量均明显低于模型组，而LVEF与LVFS高于模型组，提示氨氯地平可有效改善肾性高血压大鼠心肌重构，进而改善心脏功能。氨氯地平可改善糖尿病大鼠缺血诱导的骨髓EPC动员障碍、缺血区血管新生及心肌梗死后心功能［9－10］。马香芹等［11］研究发现，替米沙坦和氨氯地平均能有效改善高血压左心室重构，其机制可能与降低血浆和心肌组织ANP、ALD含量相关。p38－MAPK信号通路在诱导心肌细胞凋亡与心肌功能障碍过程中均发挥重要作用［12］。AP－1是调节炎性细胞因子表达的重要转录因子，与AP－1位点结合后可增强炎症因子的转录水平，因此，其参与调控炎症反应的发生过程［13］。本研究中，与模型组比，实验组大鼠心肌组织p－p38MAPK、AP－1蛋白相对表达量降低，提示氨氯地平可能通过下调心肌组织p－p38MAPK、AP－1蛋白表达，抑制p38MAPK/AP－1通路的信号转导，从而有效改善肾性高血压大鼠心肌重构。
作者：夏哲林 周彬 叶鑫 章欣
