曾祥国 向发云 张鹏 韩永超 吴润玲 顾玉成 王晴芳
摘要：在实验室条件下，采用菌丝生长速率法测定了13种杀菌剂对发生在湖北的草莓胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）的生物活性。结果表明，供试杀菌剂对草莓炭疽病菌菌丝抑制作用存在明显差异，对草莓胶孢炭疽病病菌毒力最强的是好立克、丙环·咪鲜胺和施保功，其EC50值分别为0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L，福星、施保克、百泰、世高、凯特、溴菌腈和凯润的EC50值均相对很低，这10种杀菌剂均可作为防治草莓胶孢炭疽病的首选杀菌剂；腈菌唑、翠贝和二氰蒽醌的抑制活性较差，EC50值分别为12.12、17.58和106.99 mg/L。
关键词：草莓炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）；毒力测定；杀菌剂；筛选
Toxicity Test of 13 Types of Fungicides for Strawberry Anthracnose in Laboratory
ZENG Xiang-guo，XIANG Fa-yun，ZHANG Peng，HAN Yong-chao，WU Run-ling，GU Yu-cheng，WANG Qing-fang
（Institute of Economic Crops， Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China）
Abstract：The bioassay of 13 fungicides against Colletotrichum gloeosporioides（Penz.）Sacc.，which caused strawberry anthracnose in Hubei province， was carried out by means of mycelium growth rate method. The results showed that there were big differences in inhibition effects on C. gloeosporioides by various fungicides， among which tebuconazole， the mix of Propiconazol and Prochloraz showed the best effects to strawberry anthracnose with the EC50 value of 0.002 2， 0.005 6 and 0.009 3 mg/L respectively， followed by Flusilazole， sporgon， 60% Pyraclostrobin Carbatene， Score， Cahrio and Bromothalonil. These 10 fungicides were the first choices to control C. gloeosporioides. And Myclobutanil， 50% Stroby WG， dithianon had the least effects with the EC50 value of 12.12， 17.58 and 106.99 mg/L respectively.
Key words： Colletotrichum gloeosporioides（Penz.） Sacc.； toxicity test； fungicide； screening
草莓（Fragaria ananassa Duchesne）有“果中皇后”之称，营养丰富，经济价值很高。自1931年首次报道草莓炭疽病以来，已有多国报道该病的发生，其广泛的传播性和潜在危害已被广泛关注[1]。高温湿润的气候条件适宜该病发生。因此，其对7～8月份草莓生产苗繁育造成的损失尤为严重。我国于1997年由叶正文等首次发现草莓炭疽病，湖北省该病发生越来越重，严重阻碍了草莓产业的发展，尤其是在高温多湿的育苗季节更为严重。目前对该病害的研究主要有叶正文等对抗病品种筛选、龙军等[3-9]对该病原菌生物学特性的研究等，针对防治该病害的农药筛选研究很少。作者力求筛选出对草莓胶孢炭疽病病菌毒力大、抑菌效果好的杀菌剂供生产上使用。因此试验选用13种杀菌剂作为供试药剂，采用菌丝体生长速率法对草莓胶孢炭疽病病菌进行室内毒力测定，以期筛选出对草莓胶孢炭疽病病菌毒力强的杀菌剂，为防治草莓炭疽病提供参考。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
草莓炭疽病病原菌来源于湖北省农业科学院经济作物研究所分离，并通过分子鉴定保存的炭疽病病原胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides （Penz.） Sacc][10]，经过单孢纯化后获得供试菌株。
1.2 供试药剂
经预备试验筛选出以下几种药剂做药效测定（表1）。
1.3 杀菌剂室内毒力测定
采用杀菌剂室内生长速率法测定[10]。上述药剂均用无菌水配制成系列浓度梯度的溶液，在无菌操作台上将不同梯度的药剂加入到灭过菌的冷却到40～50 ℃的PDA培养基中，倾入后立即水平方向平稳摇动三角瓶，使药剂在培养基中均匀分布后倒平板。在每个平板中央接入一块直径为0.5 cm的菌苔，以不加药剂为空白对照。25 ℃恒温黑暗培养6 d后用“垂直十字交叉法”测量菌落直径，检查药剂的抑菌效果，每处理5皿，重复3次。
将PDA培养基放入121 ℃高压灭菌20 min。按每个三角瓶分装60 mL。分装后放在无菌操作台上，用移液枪移入被稀释后的不同浓度的农药，并摇匀。然后快速将其分别倒入3个培养皿中。每个培养皿倒入20 mL，待其冷却凝固后在培养皿左上方贴标签纸标记（预备做农药抑菌试验的农药的编号），然后用打孔器将供实验菌打孔，移入培养皿内。然后将培养皿倒置于培养箱中，25 ℃恒温黑暗培养6 d，观察并测定抑菌圈直径。检查药剂的抑菌效果，每处理3皿，重复3次。通过十字交叉法对抑菌圈的大小进行测定。
抑菌率=■×100%
将药剂对菌丝的抑制率转换成几率值（y），药剂各浓度（mg/L）转换成对数值（x），进行线性回归分析，求出毒力回归方程和相关系数，最后计算出各药剂对病菌菌丝生长的抑制中浓度（EC50）。
1.4 数据分析
试验数据的分析均用SPSS 11.5和Excel 2003完成。
2 结果与分析
2.1 杀菌剂对病原菌EC50的比较
不同药剂对炭疽病病原菌菌丝生长的抑制中浓度（EC50）见表2。从表2中可以看出，13种药剂对炭疽病病原菌菌丝的生长速度具有不同程度的抑制作用，抑制效果表现出明显的差异。
从各药剂的毒力回归方程和EC50可以看出，13种药剂中好力克、丙环·咪鲜胺和施保功3种杀菌剂对病菌的毒力作用最强，EC50值分别为0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L；其次是福星，EC50为0.17 mg/L；施保克EC50为1.11 mg/L，百泰EC50为1.23 mg/L，凯特EC50为1.57 mg/L，世高EC50为1.83 mg/L，凯润EC50为4.22 mg/L，溴菌腈EC50为4.42 mg/L，相对较低；而腈菌唑、翠贝和二氰蒽醌对病菌的抑制作用差，其中二氰蒽醌的抑制作用最差，EC50值达到106.99 mg/L。
2.2 病原菌对杀菌剂的敏感性比较
回归方程的斜率越大，表明病菌对该杀菌剂的敏感性越差。杀菌剂按照斜率值（表2）从大到小排序依次为二氰蒽醌、腈菌唑、溴菌清、施保克、翠贝、凯润、凯特、世高、百泰、福星、施保功、好立克和丙环·咪鲜胺，说明病菌对施保功、好立克和丙环·咪鲜胺最敏感。
3 讨论
通过分析各药剂的毒力回归方程斜率值与其EC50值，综合分析认为溴菌清、施保克、凯润、凯特、世高、百泰、福星、施保功、好立克、丙环·咪鲜胺10种药剂的抑菌效果较好。其中施保克对病菌的EC50值较低，且斜率值较高，成为最具潜力的使用药剂。其他药剂也具有很好的应用价值，在生产上可以轮换使用，防止病菌产生耐药性。
筛选出的10种杀菌剂有着不同的作用方式，其中施保克为咪唑类杀菌剂，主要作用方式是抑制甾醇类生物合成，虽然不具有内吸作用，但具有一定的传导性能。苯醚甲环唑、丙环唑、氟硅唑、戊唑醇属于三唑类杀菌剂，其作用机理为影响甾醇类生物合成，使菌体细胞膜功能受到破坏，具有内吸性。吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，来源于天然抗生素，为线粒体呼吸抑制剂，不仅具有广谱的生物活性，更具有高度的选择性，对环境安全。室内药剂筛选的结果虽可以看出药剂对菌丝具有抑制作用，但由于受很多因素的影响，培养皿内的抑菌活性和在田间使用上的作用效果不一定完全一致，因此还有待作进一步田间的防治效果试验。
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