作者：田志杰，沈楠，吕士杰，王程，姜艳霞，罗军
【摘要】 目的研究木耳多糖对高强度微波辐射大鼠血清超氧化物歧化酶（sod）和肝脏自氧化作用的影响。方法60只清洁级wistar大鼠随机分为6组，即：正常对照组、辐射模型组、药物对照组、治疗组、预防组、新模型组，每组10只。正常对照组、辐射模型组、新模型组每天给予1.5 ml的蒸馏水灌胃；药物对照组、治疗组、预防组每天灌胃1.5 ml浓度为1%的木耳多糖溶液。按体质量进行乌拉坦麻醉，腹主动脉取血和肝脏。血清中sod活性和肝脏中的mda含量分别采用邻苯三酚自氧化和tba法测定。结果木耳多糖提高动物血清中sod活性（p<0.05）而且表现为时间越长活性越高（p<0.01）；200 mw/ cm2的高功率微波辐射明显降低了血清中sod活性（p<0.05），呈现出距离辐射时间越短，sod活性越低的现象(p<0.01)；通过给予木耳多糖发现其预防功能要优于治疗（p<0.05）。同样，木耳多糖能够降低肝脏内mda的的含量(p<0.01)。200 mw/ cm2高功率辐射显示出辐射初期对mda含量的明显提高（p<0.01）。结论高功率微波辐射可以明显降低血清中的sod活性，升高肝脏中的mda含量。木耳多糖对高功率微波辐射具有良好的防护作用，尤其是在微波辐射中，作为防护微波辐射的保健品和药物具有良好的前景。
【关键词】 木耳多糖；超氧化物歧化酶；丙二醛；高强度微波辐射
abstract：objectiveto examine the effects of polysaccharides from auricularia auricular on sod in serum and lipid peroxidation in liver homogenate of rat in vitro by high power microwave radiation (200 mw/cm2).methods60 female wistar rats were divided randomly into 6 groups: normal control group, irradiation model group, drug control group, treatment group, prevention group, new model group. some of the rats were exposed to continuous microwave radiation at power density of 200 mw/cm2 for 10 minutes. some rats were fed with polysaccharides from auricularia auricular orally for 10 days at the dose of 150 mg/kg/day (about equal to 10 times of human), once a day. the rats were anesthetized by urethane, then drawn blood from abdominal aorta and liver 11 days after drug withdrawal. the activiy sod in serum and the content mda in liver homogenate were measured by pyrograllol autoxidative and thiobarabituric acid (tba)colorimetric method. resultspolysaccharides from auricularia auricular could significantly increase the activities of sod in serum （p<0.05） and the longer the time was, the more the contents were(p<0.01). sod in serum were decreased remarkably by high power microwave radiation (200 mw/cm2)(<0.05). polysaccharides from auricularia auricular could also obviously inhibit lipid peroxidation of liver homogenate in vitro. mda in liver could be increased by high power microwave radiation (200mw/cm2).conclusionpolysaccharides from auricularia auricular possess the effect of improving the activity of sod in serum and anti-lipid peroxidation of liver, which shows the protection of high power microwave radiation (200mw/cm2).
key words：polysaccharides from auricularia auricular; sod; mda; high power microwave radiation
微波（microwave）是指频率为300mhz～300 ghz（在空中波长是1m至1mm）的电磁波。在1973年关于微波辐射的生物学效应和一些健康危害因素的华沙国际讨论会上，确定将微波功率密度分为3个范围：高强度微波(平均表面功率大于10 mw/ cm2)主要表现为热效应 ；中等强度微波(小于1～10 mw/ cm2)主要引起弱热效应；低强度微波辐射<1 mw/cm2不太可能产生热效应。schwan等对此建立经典理论：在生物体内已建立的效应中，最重要的是发热，但是直接与膜、生物聚合物以及生物液的相互作用也是存在的［1］。
1998年，inirc（international non-ionizing radiation committee）因为10 mw/ cm2具有导致温度升高1℃的风险而不会引起不可逆的损伤被确定为暴露极限,眼部暴露极限为5 mw/cm2。而有些实验数据显示>100 mw/cm2才会引起组织不可逆损伤［2］。
微波辐射(包括高强度和低强度)损害主要集中在动物对热易感部位或单细胞的研究,也包括中枢神经系统的损伤如细胞形态的、神经递质以及行为的改变，当然，这需要很精确的、集中、长时间的辐射［2，3］。
事实上，职业（尤其在军事）接触者的微波辐射>100 mw/cm2［4］。在日常生活中也不排除由于设备泄露短时间接触到高强度微波辐射的可能。
木耳auricularia auricula （l.） underw，真菌学分类属担子菌纲，木耳目，木耳科。其分布广泛，且产量高。木耳多糖具有多种生物活性，而且不同化学结构和不同构象的木耳多糖组分表现不同的生理活性，包括抗白细胞降低、抗肿瘤、抗辐射、抗突变、抗炎症、抗血栓形成、降低血糖、降低脂褐质含量等作用［5］ 。但是，国内外有关木耳多糖抗高强度微波辐射的功效尚未见报道。
本实验从职业（如雷达及通讯检测）和意外情况下接触微波辐射角度考虑，根据本实验室多年研究实验结果，确定微波辐射量表面功率为200 mw/cm2，辐射时间为10 min，探讨在此功率密度下微波辐射对sod活性的影响及木耳多糖是否具有抗微波辐射作用，从而为专业从事电磁领域者提供治疗保健依据。
1 材料
木耳多糖为本实验室提取，蒽酮-硫酸法测定含糖量为84%；三羟甲基氨基甲烷、邻苯三酚、乙二胺四乙酸二钠均为国产分析纯试剂。
电子天平；hh-601超级恒温水浴箱；gys-2不锈钢电热恒温水浴箱；hzq-c空气浴振荡器；gzx-dh-50x55-s电热恒温干燥箱；t6 新世纪紫外分光光度计；721可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司）；ph计；中草药粉碎机等。
2 方法
2.1 实验动物模型与饲养清洁级wistar大鼠60只，购回后在紫外消毒、温度23℃的室内自由喂清洁级大鼠专用饲料和水进行1周的适应性饲养后随机分为6组，即：正常对照组、辐射模型组、药物对照组、治疗组、预防组、新模型组（迟10 d微波辐射模型组），每组10只。对辐射模型组、治疗组给予微波辐射表面功率200 mw/cm2，10 min的辐射。第11天对预防组、新模型组给予相同条件的辐射。
正常对照组、辐射模型组、新模型组每天给与1.5 ml的蒸馏水灌胃；药物对照组、治疗组、预防组每天给予1.5 ml浓度为1%的木耳多糖溶液（按150 mg/kg体质量,为人类摄取木耳量中木耳多糖的10倍）。第10天，对预防组和新模型组进行相同功率和时间的辐射。禁食不禁水，18 h后（即第11天），按体质量进行乌拉坦麻醉，腹主动脉取血和摘取肝脏。
2.2 血清和肝匀浆的制备腹主动脉血在室温下20 min后，2 500 r/min离心5 min，得到血清；肝脏利用pbs配制成10%的肝匀浆。
2.3 统计学分析对于两组实验结果的值进行独立样本的t-检验；对于3组以上实验结果考虑其每个因素的影响及其各因素间的交互作用，利用spss13.0软件进行多因素方差分析。
2.4 实验步骤
2.4.1 血清sod的制备及sod测定液的配制采用临苯三酚自氧化法测定sod活性［6］。取0.4 ml血清，加入0.4 ml乙醇-氯仿混合液（两者体积比为5∶3），振荡2 min，4 000 r/min离心5 min以除去蛋白质，上清液为sod抽提液。
取7支试管，分别为对照管和样品管（6组实验动物血清）。反应条件如下：样品管取sod抽提液100 μl,加入4.8 ml的ph 8.2 tris-hcl 缓冲液(含0.1 mmol/edta)，对照管加入4.9 ml的ph8.2 tris-hcl 缓冲液(0.1 mmol / edta)，混匀，在25℃恒温水浴中保存10 min后各加入6 mmol/l邻苯三酚100μl，邻苯三酚加入后，摇匀，5 min内测定对照管和样品管的吸光率a对照和a样品，测定波长320 nm，利用邻苯三酚法测定sod抽提液的a值并计算抑制率。抑制率越高，sod活性越高，否则相反。
抑制率i（%）= (△a对照 - △a样品)/ △a对照 ×100%。
2.4.2 肝脏过氧脂质化采用tba法［7］，测定肝脏在体外的自氧化作用。取8支试管，分别为对照（1组）、标准（1组）和样品管（6组实验动物血清）。标准组取1 ml mda (50 nmol/ml)，样品组分别取测定mda的肝匀浆1.0 ml于试管中，再加入蒸馏水1 ml,对照组取蒸馏水2 ml代替，混匀后于37℃空气恒温浴震荡器中震荡1.5 h，取出后加入10%的三氯醋酸2.0 ml, 0.67% tba1.0 ml ,混匀后在沸水浴中反应15 min，取出后流水冷却，以3 000 r/min离心15 min，取上清液在532 nm波长处比色，测定a值计算对mda的抑制率，并利用标准mda试剂求mda含量。
抑制率i（%）=（a对照-a样品）/a对照×100%
抑制率i（%）=（a标准-a样品）/a对照×100%
3 结果
3.1 邻苯三酚自氧化作用
3.1.1 木耳多糖对sod的影响
结果见表1。表1 木耳多糖对邻苯三酚自氧化作用的影响(略)
3.1.2 微波辐射对sod的影响
结果见表2。表2 高强度微波辐射对邻苯三酚自氧化的影响(略)
3.1.3 木耳多糖对高功率微波辐射大鼠血清sod的影响
结果见表3。表3 木耳多糖对高强度微波辐射鼠血清邻苯三酚自氧化的影响(略)
3.2 对大鼠肝匀浆脂质过氧化作用的影响
3.2.1 木耳多糖对体外肝脏自氧化反应的影响
结果见表4。表4 木耳多糖对肝脏脂质过氧化的影响(略)
3.2.2 微波辐射对体外肝脏自氧化反应的影响
结果见表5。表5 高强度微波辐射对肝脏脂质过氧化的影响(略)
3.2.3 木耳多糖对微波辐射大鼠体外肝脏自氧化反应的影响
结果见表6。表6 木耳多糖对高强度微波辐射鼠肝脏脂质过氧化的影响(略)
4 讨论
sod作为专一性清除生物氧化中产生的超氧阴离子的物质在减少和阻止脂质过氧化反应延缓机体衰老中起着非常重要的作用，sod活性的高低是衡量人体衰老的重要指标，也是机体抗过氧脂质化的潜在能力的重要参数。微波辐射尤其是高功率微波辐射所产生的有害的生物学效应对sod的影响也有待于深入的研究。
本实验研究显示，木耳多糖可提高动物血清中sod活性（p<0.05），而且表现为时间越长活性越高（p<0.01），说明木耳多糖具有良好的抗衰老作用；200 mw /cm2的高功率微波辐射对血清中sod活性的影响比较显著（p<0.05），呈现出距离辐射时间越短，sod活性越低的现象(p<0.01)，说明200 mw/cm2下的高功率微波辐射能够产生比较多的超氧阴离子而且需要一定的时间来清除，辐射在机体产生的应激效应十分明显；通过给与木耳多糖发现其预防功能要优于治疗（p<0.05）。同样，木耳多糖对抑制肝脏在体外的自氧化作用也有明显的效果，说明木耳多糖能够明显降低肝脏内mda的含量(p<0.01)。但是200 mw/cm2高功率辐射下的第2天mda含量有明显的提高（p<0.01），而木耳多糖的预防与治疗效果不明显和在第11天则降低到正常水平可能与微波辐射的作用部位不同［8］和动物皮毛的反射作用有关［1］，或者是由于机体为了清除产生的超氧阴离子而重点保护肝脏而发生的一种反应，而后者的可能性比较大。
综上所述，高功率微波辐射可以明显降低血清中的sod活性、升高肝脏中的mda含量。木耳多糖对高功率微波辐射具有良好的防护作用，尤其是在预防微波辐射中，作为防护微波辐射的保健品和药物具有良好的前景。
【参考文献】
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［2］ye juan，yao ke，lu deqiang，et power density microwave radiation induced early changes in rabbit lens epithelial cells［j］. chinese medical journal 2001, 114(12)：1290.
［3］董霁，彭瑞云，王水明， 等.安多霖对微波辐射致大鼠脑损伤的防治作用研究［j］.中国体视学与图像分析，2006，11（2）：131.
［4］anders ahlbom，adele green, leeka kheifets,etc. epidemiology of health effects of radiofrequency exposure［j］. environ health perspect 2004，112:1741.
［5］季宇彬.中药多糖的化学与药理［m］.北京：人民卫生出版社，2005：231.
［6］赵云斌，刘敏，余忠谊. 邻苯三酚自氧化法测定血中超氧化物歧化酶的活性［j］.中国卫生检验杂志，2006，11（4）：387.
［7］刘刚，王辉，张先周，等.青藤碱清除氧自由基和抗脂质过氧化作用［j］.中草药，2006，37（1）：48.
［8］domenico formica , sergio silvestri. biological effects of exposure to magnetic resonance imaging: an overview［j］. biomedical engineering online，2004, 3:11.
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