【关键词】 姜黄;生姜;幼龄大鼠;良性前列腺增生(bph)
【摘要】 目的观察姜黄与生姜醇提物对幼龄sd大鼠前列腺生长的影响。方法 取姜黄与生姜各500 g，粉碎混匀后加70%乙醇回流提取制得醇提物;取体质量约50 g的sd大鼠随机分成正常对照组、阳性药物组、醇提物低、中、高剂量组，每组13只。正常对照组及阳性药物组均按20 ml·kg-1体质量灌胃(ig)给予生理盐水(ns)，另阳性药物组按1 mg·kg-1体质量皮下注射(sc)己烯雌酚，每周3次;低、中、高剂量组按20 ml·kg-1体质量ig给予醇提物，连续3周。3周后，测定血清总酸性磷酸酶(tap)水平，再取睾丸、精囊腺、前列腺(腹叶、侧叶、背叶)分别称取湿重，计算各指数。结果 与正常对照组比较，醇提物中、高剂量组的大鼠前列腺生长均受到明显抑制(p<0.05)，低剂量组虽显示一定的抑制作用，但无统计学意义;醇提物低、中、高剂量对大鼠睾丸生长影响不大而对精囊腺影响显著(p<0.01);醇提物低、中、高剂量均能显著降低tap的水平(p<0.05或p<0.01)。结论 姜黄生姜醇提物中、高剂量均明显抑制幼龄大鼠的前列腺生长，对睾丸的生长无明显影响。
【关键词】 姜黄;生姜;幼龄大鼠;良性前列腺增生(bph)
abstract:objective to observe the combined effects of curcuma and ginger on the growth of prostate of juvenile sprague dawley rats. methods take curcuma and ginger 500 g respectively,add 70% ethanol to get the ethanol extracts. sd rats with body weight about 50 g were randomly divided into normal control group,positive medicine group,ethanol extracts of low-,mid- and high-dose groups,with 13 rats in each group. rats in the normal group and positive medicine group were given ns at 20 ml per kg body weight,and rats in the positive medicine group were treated by diethylstilbestrol through subcutaneous injection at 1 mg per kg body weight three times a week. rats in low-,mid- and high-dose groups were treated by ethanol extract through intragastric administration at 20 ml per kg body weight. three weeks later,the level of total acid phosphatase(tap)in serum was determined and the testis,seminal vesicle and prostate (ventral,lateral and dorsal)were separated and weighted for viscera index. results in comparison with the normal control group,significant inhibition was observed in prostate growth in mid- and high-dose groups(p<005)in three weeks,while the similar effect was observed in the rats in low dose group but with no statistical significance. no side effect on testis was observed in the rats in various groups,while significant effect on seminal vesicle was observed. serological tests of tap showed that tap levels of the rats in the low-,mid-,and high-dose groups decreased significantly(p<0.05 or 0.01). conclusion the growth of prostate of juenile sprague dawley rats in mid- and high-dose groups were inhibited significantly,and no side effect on testis was observed.
key words:curcuma;ginger;juvenile rats;benign prostatic hyperplasia(bph)
良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，bph)是困扰老年男性的常见疾病，以排尿困难、尿闭等为主要临床特征。WWw.lunwen.net.cn姜黄根茎中主要含挥发油类及姜黄素两大类成分。姜黄素类为二苯基庚烃类成分，主要含姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素[1]。生姜的块茎主要含挥发油类、姜辣素、二苯基庚烷[2]。杨磊等[3]的研究表明姜黄素能抑制雄激素受体的表达，说明姜黄素具有类雌激素的作用。shukla等[4]通过研究发现[6]-姜酚(姜辣素)在lncap细胞和大鼠前列腺腹叶中对睾酮诱导的抗凋亡蛋白bcl-2和存活素的表达具有向下调节作用，表明[6]-姜酚可能具有一定的抗雄性激素作用。可见，两者可能具有的类雌激素作用与治疗前列腺增生的抑制雄性激素的水平相符。当前市面上用于治疗前列腺增生的制剂中未见有姜黄或生姜。本研究以姜黄为主辅以生姜，考察两者组合的醇提物对幼龄sd大鼠前列腺的影响，为开拓良性前列腺增生的用药范围提供参考。现报道如下。
1材料
1.1药物
姜黄(批号080401d510，四川)与生姜(购自农贸市场)经广州中医药大学青蒿研究中心朱宇同教授鉴定，分别为姜科植物姜黄curcuma longa l.的干燥根茎与姜科植物姜zingiber officinale rosc.的新鲜根茎;姜黄素对照品(自制)，经hplc法测定纯度为98.6%;己烯雌酚注射液(2 mg/ml，批号080605，上海通用药业股份有限公司)。
1.2动物
sd大鼠，雄性，体质量45～55 g，spf级，由广东省医学实验动物中心提供。实验动物质量合格证号0046490，许可证号：scxk(粤)2008-0002，粤监证字2008a020。
1.3仪器
lc-10a高效液相色谱仪，spd-m10avp光二极管阵列检测器(日本岛津公司);olympus全自动生化分析仪(au5421，日本奥林巴斯公司)，由南方医院检验科提供;startorius(bs224s)万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)。
1.4实验方法
1.4.1醇提物的制备及含量测定参考文献[5-9]制备姜黄生姜提取物。取姜黄、生姜各500 g粉碎，混合均匀，加生药3倍量的70%(φ)乙醇回流2次，时间分别为1.5 h、1.0 h，过滤，合并滤液，回收，浓缩制成干膏(每克干膏相当于姜黄或生姜均为54 g)，以hplc法对有效成分姜黄素进行定量。
1.4.2动物实验
1.4.2.1分组及给药将sd大鼠随机分成正常对照组，阳性药物组(己烯雌酚)，醇提物低、中、高剂量组(共5组)，每组13只。正常对照组及己烯雌酚组均按20 ml·kg-1体质量灌胃(ig)给予生理盐水(ns)，阳性药物组再按1 mg·kg-1体质量皮下注射(sc)己烯雌酚，每周均3次;低、中、高剂量组分别按20 ml·kg-1体质量ig给予醇提物(分别相当于生药8、22 、36 g·kg-1·d-1)。各组均自由饮水，摄食，连续3周(21 d)。
1.4.2.2解剖、计算于第22天称取大鼠体质量，取血，测定总酸性磷酸酶(tap)水平;随后处死动物，剖取前列腺腹叶、侧叶、背叶及精囊腺、睾丸，分别称取湿质量，计算各脏器指数。
1.4.2.3统计学处理采用spss11.5统计软件进行数据处理，实验数据以(±s)表示，各组间数据比较采用t检验,以p<0.05为差异有显著性。
2结果
2.1hplc法测定醇提物中姜黄素的含量
2.1.1色谱条件
参考文献[10-11]拟定以下色谱条件。色谱柱：diamonsil c18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-4%(φ)冰醋酸溶液(50∶50);流速：0.8 ml/min;柱温：25 ℃;检测波长：254 nm。
2.1.2流动相的选择
取姜黄素对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/ml的溶液，精密量取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以不同比例的流动相进样，最终确定乙腈-4%(φ)冰醋酸溶液比例为60∶40，在该条件下姜黄素的峰形较佳。
2.1.3λmax的选择
利用二极管阵列检测器在190～370 nm范围内对姜黄素对照品溶液进行扫描，结果在263 nm处具有最大吸收，故以263 nm为检测波长。
2.1.4线性试验
精密量取姜黄素对照品溶液(0.100 9 mg/ml)3、6、9、12、15、18 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以姜黄素色谱峰峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制曲线，得回归方程为：y=2575560x-51928.7，相关系数r2为0.999 909，表明姜黄素在0.3～1.8 μg范围内线性关系良好。
2.1.5精密度试验
精密量取上述对照品溶液(0.100 9 mg/ml)，连续进样5次，每次10 μl，记录色谱图，计算得姜黄素峰面积的平均值为2486170，rsd=0.5%(n=5)，表明测定的精密度良好。
2.1.6稳定性试验取姜黄素对照品加甲醇制成0.1 mg/ml的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液;另取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 ml量瓶，加甲醇适量超声溶解，放冷、定容、滤过，再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述供试品溶液各10 μl分别在0、3、6、9、12 h注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各时间点的含量及rsd(%)，结果得姜黄素平均含量为7.4%，rsd=1.9%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.1.7回收试验取姜黄素对照品适量，加甲醇制成约1.25 mg/ml的溶液，作为姜黄素对照品贮备液。取贮备液适量加甲醇稀释成含姜黄素0.1 mg/ml的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液;另取醇提物约0.02 g，共5份，精密称定，置25 ml容量瓶， 分别精密加入上述对照品贮备液1 ml，加甲醇适量，超声溶解，放冷、定容、滤过，滤液再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取对照品溶液及供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算各供试品溶液中姜黄素的回收率(%)及rsd(%)，结果得平均回收率为100.7%，rsd为1.1%。
2.1.8重复性试验取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 ml量瓶，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，吸取滤液适量以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算姜黄素的含量。结果rsd为1.4%，表明测定的重复性良好。姜黄素对照品与醇提物的色谱图见图1、2(横坐标为样品洗脱时间;纵坐标为信号响应值)。[psd121〗图1姜黄素对照品hplc图figure 1 hplc chromatogram of curcumin[psd122;s*2〗图2醇提物hplc图figure 2hplc chromatogram of ethanol extracts
2.2动物实验
2.2.1醇提物对大鼠体质量增长率的影响结果见表1。与正常对照组比较，己烯雌酚组明显降低了大鼠的体质量(p<0.01)，说明雌激素具有抑制体质量的作用。醇提物低、中、高剂量组随着剂量的增加，大鼠体质量抑制程度增加，但不及己烯雌酚组强烈。
2.2.2醇提物对大鼠睾丸、精囊腺的影响结果见表2。与正常对照组比较，己烯雌酚组大鼠睾丸的生长明显受到抑制，而精囊腺受影响不大;醇提物低、中、高剂量均能不同程度抑制睾丸生长，但不及己烯雌酚显著(p<0.01);低、中、高剂量对精囊腺指数影响较大(p<0.01)。
2.2.3醇提物对大鼠前列腺的影响结果见表3。与正常对照组比较，己烯雌酚组的大鼠总前列腺指数显著降低(p<0.01);醇提物低剂量组前列腺生长虽然受到抑制，但无统计学意义，而中、高剂量组前列腺生长受抑制程度显著(p<0.01)，且随浓度增加，作用增大。
2.2.4醇提物对各组大鼠血清总酸性磷酸酶(tap)的影响结果见表4。与正常对照组比较，己烯雌酚组总酸性磷酸酶(tap)的水平显著降低;醇提物低、中、高剂量组的tap也明显降低，随浓度增大，降低的幅度越大。表1醇提物对大鼠体质量增长率的影响表2醇提物对大鼠睾丸、精囊腺的影响表3醇提物对大鼠前列腺的影响表4醇提物对大鼠tap的影响
3讨论
参考文献[12]，本研究以体质量为45～55 g的幼龄sd大鼠为实验动物，结果表明姜黄生姜醇提物对该种动物的前列腺生长具有抑制作用。低剂量对前列腺作用不明显，中、高剂量作用明显，且对侧叶、背叶均有抑制作用，而对腹叶的抑制仅在高剂量时明显。可见，姜黄生姜醇提物对大鼠前列腺各叶的抑制作用具有选择性。tap主要来自前列腺，健康男性血清中1/3～1/2的tap来源于前列腺，即前列腺特异性酸性磷酸酶(pap)。当前列腺增生时其表达水平升高，故血清pap活性的变化可以反映前列腺状态，前列腺组织增生加强，血清pap升高[13]，同理tap也有一定程度的升高。本实验中阳性药组与醇提物低、中、高剂量组的tap水平均反映出了这一特征。
实验结果表明，姜黄与生姜等量组合醇提物对幼龄sd大鼠的前列腺生长具有显著的抑制作用，但同时对精囊腺、睾丸指数也有不同程度的抑制作用，未来的研究可通过合理增加药味以消除这些可能的副作用。
致谢 ： 本研究得到了广州中医药大学热带医学研究所沈小玲老师以及青蒿研究中心药学室诸位同事提供的无私帮助，在此表示衷心的感谢!
【参考文献】
[1] 胡春生,陈炜林,易传祝，等.姜黄素抗氧化作用人体试食研究[j].湖南中医药大学学报,2007,27(5):64.
[2] 卢传坚,欧明,王宁生,等.姜的化学成分分析研究概述[j].中药新药与临床药理,2003,14(3):215-217.
[3] 杨磊,张莲英,陈蔚文，等.姜黄素对前列腺癌细胞lncap增殖的影响[j].中国病理生态杂志,2006,22(11):2194-2197.
[4] shukla y,prasad s,tripathi c,et vitro and in vivo modulation of testosterone mediated alterations in apoptosis related proteins by [6]-gingerol[j].mol nutr food res，2007,51(12):1492-1502.
[5] 郭峰,马香芹.正交设计法优选姜黄素的提取工艺[j].河南职工医学院学报,2006，18(1):10.
[6] 盛蓉,谈静,宋英.姜黄提取工艺研究[j].天津药学,2005,17(5):1.
[7] 唐课文,周丹.从姜黄中提取姜黄素的研究[j].天然产物研究与开发,2004,16(3):231.
[8] 张雪红,李华昌.高效液相色谱法测定生姜的6-姜酚[j].分析试验室,2005,24(3):8.
[9] 王维皓,王智民,徐丽珍,等.hplc法测定生姜中有效成分6-姜辣素的含量[j].中国中药杂志,2002,27(5):348.
[10] 刘彦生,王宪利,刘丰,等.hplc法测定安宫牛黄中姜黄素的含量[j].中华医药学刊,2007,25(5):1038.
[11] 贾海英,杜守颖,李冬雪,等.高效液相色谱法测定黄丝郁金中姜黄素的含量[j].时珍国医国药,2005,16(4):318-319.
[12] 徐叔云,卞如濂，陈修,等.实验药理方法学[m]. 3版.北京:人民卫生出版社,2002:1553.
[13] 廖泽云.前列冲剂对前列腺增生大鼠血清酸性磷酸酶及t和e2的影响[j].实用医药杂志,2006,23(3):337.
中国论文网(www.lunwen.net.cn)免费学术期刊论文发表,目录,论文查重入口,本科毕业论文怎么写,职称论文范文,论文摘要,论文文献资料,毕业论文格式,论文检测降重服务。
