甘草总黄酮含量测定(甘草苷含量测定)

中国论文网 发表于2022-11-06 23:27:49 归属于药学论文 本文已影响570 我要投稿 手机版

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作者:崔永明,石月,陈悟,曾庆福,余龙江

【摘要】   目的建立甘草中甘草查尔酮a的含量测定方法。方法采用高效液相色谱(hplc)法,使用hypersil ods2色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)为流动相,流速1.0 ml·min-1, 检测波长为372 nm,柱温 25℃。结果甘草查尔酮a线性范围0.2~1.0 μg, r=0.999 2;精密度实验rsd为1.51 %;重复性实验rsd为2.54 %;稳定性实验rsd为1.72 %;平均加样回收率98.76 %,rsd=1.94 %。结论该方法灵敏、准确,重复性好,可作为甘草中甘草查尔酮a的含量测定方法。

【关键词】 甘草 甘草查尔酮a 高效液相色谱法

  abstract:objectiveto establish a determination method of licochalcone a in licorice. methodsusing hplc method, the system consisted of hypersil ods2 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm),mobile phase of methanol-water- glacial acetic acid (60∶40∶1) mixture, with a flow rate of 1.0 ml·min-1; detection wavelength was at 372 nm column temperature of 25 ℃. resultslinear range was 0.1~1.0 μg with the r of 0.999 2,precision test ,repeation test ,and stability test were 1.51%,2.54% and 1.72%,respectively .the mean recovery was 98.76 %, with respectively rsd of 1.94 %. conclusionthe methoed is sensitive, accurate and with good reproducibility and can be used as the determination method of licochalcone a.

  key words:licorice; licochalcone a; hplc

药用甘草为豆科植物乌拉尔甘草glycyrrhiza uralensis fisch.,胀果甘草glycyrrhiza inflata bat.或光果甘草glycyrrhiza glabra l.的干燥根及根茎,是多年生药用草本植物。植化研究表明甘草中存在大量的酚类成分,这些具有生物活性的成分有望成为开发新药的来源[1]。甘草查尔酮a(licochalcone a)是存在于甘草中的一种酚类查尔酮化合物[2],临床及药理研究表明,甘草查尔酮a具有抗氧化[3]、抗炎[4]、抗菌[5]、抗肿瘤[6]、抗利什曼原虫病[7]、免疫促进和雌激素样[8]等活性,在临床上具有广泛的应用前景,但有关其含量测定的方法还未见报道。本文建立了甘草查尔酮a的hplc含量测定方法,为进一步开发甘草中这一重要活性成分提供简便可行的检测方法。

   1 仪器与试剂

美国agilent 1100液相色谱仪系统;kq-100db型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

甘草由新疆昆仑神农有限公司赠送,经新疆甘草种植中心鉴定分别为乌拉尔甘草glycyrrhiza uralensis fisch.,胀果甘草glycyrrhiza inflata bat.和光果甘草glycyrrhiza glabra l.。甘草查尔酮a对照品,本实验室自制,经质谱、碳谱和氢谱鉴定为甘草查尔酮a(licochalcone a), 归一化测定含量为98.81%。乙腈、甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其他试剂均为分析纯。

   2 方法与结果

  2.1 溶液制备

  2.1.1 对照品溶液的制备准确称取在60℃干燥至恒重的甘草查尔酮a对照品适量,用流动相配成浓度为0.1 mg·ml-1的对照品储备液,待用。

  2.1.2 供试品溶液的制备准确称取干燥恒重甘草粉末(过60目筛)0.5 g,置100 ml具筛锥形瓶中,加入甲醇25 ml,超声处理(功率200 w,频率40 khz)30 min,过滤,再加入甲醇20 ml,超声处理30 min,合并滤液,减压浓缩至干,加流动相溶解并定容至50 ml,微孔滤膜(0.45 μm)过滤,即得供试品溶液。

  2.2 色谱条件

  色谱柱为大连依利特 hypersil ods2 c18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);柱温25℃;流动相为甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1);检测波长372 nm;流速1.0 ml·min-1。

  2.3 方法学考察

  2.3.1 线性关系考察

  准确吸取甘草查尔酮a对照品储备液2,4,6,8,10 ml分别置于5个10 ml容量瓶中,用流动相稀释至刻度。分别吸取上述对照品溶液各10 μl,依次注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以浓度c(μg/ml)为横坐标,色谱峰面积a为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为:a=41 308 c-142 057,r=0.999 2, 线性范围为:0.2~1.0 μg。

  2.3.2 精密度实验

  准确吸取浓度为100 μg·ml-1的甘草查尔酮a标准品溶液10 μl,重复进样5次,测得峰面积值, 计算 相对标准偏差rsd为1.51%,说明仪器良好。

  2.3.3 重复性实验

  准确称取同一批次的胀果甘草5份,按“2.1.2”项下制备样品溶液,依次测定,根据标准曲线换算甘草查尔酮a的含量,计算甘草查尔酮a含量的rsd为2.54%,表明实验方法重复性较好。

  2.3.4 稳定性实验

  取同一份待测供试品溶液,在0, 2, 4, 8, 12 h进样测定,测得甘草查尔酮a峰面积值并计算样品峰面积的rsd为1.72%,表明供试品溶液于12 h内稳定。

  2.3.5 加样回收率实验

  准确称取已知含量的样品约0.1 g(共5份),精密加入0.10 mg/ml的甘草查尔酮a标准品1 ml,按“2.1.2”项下方法制备所需溶液,测定并 计算 含量。表1结果表明甘草查尔酮a平均回收率为98.76 %,rsd为1.94 %。表1 样品加样回收率实验结果(略)
 
  2.4 样品测定

  按照本方法的测定条件,分别测定《 中国 药典》收录的3种甘草样品,计算甘草查尔酮a的含量,结果见表2。甘草查尔酮a标准品及样品hplc图谱见图1~2。表2 甘草查尔酮a含量测定结果(略)
 
   3 讨论

  3.1 色谱条件选择

  比较了乙腈-水(60∶40)、甲醇-水(70∶30)、甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)、乙腈-甲醇-水(40∶30∶30)等流动相体系,结果第3种流动相分离效果最好,所以,本文选用甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)为流动相。

  3.2 溶液制备方法

  比较了不同提取溶剂(甲醇,乙醇,丙酮)和提取方法(回流提取,索氏提取,超声提取)的提取效果,结果表明甲醇对甘草查尔酮a的提取效果优于其他两种溶剂,索氏提取和超声提取的效果相当,均优于回流提取,但索氏提取耗时较长,故本文以甲醇为提取剂采用超声提取制备样品供试溶液。

  3.3 检测波长的选择在200~700 nm之间对甘草查尔酮a对照品溶液进行光谱扫描,结果表明在372 nm处有极大吸收,故选择372 nm为检测波长。

结果表明该方法简单,快捷,专属性强,准确度高,具有良好的重复性,可用于甘草中甘草查尔酮a的含量测定。

【 参考 文献 】
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  [2]wang qe, lee sc, wang xr. isolation and purification of inflacoumarin a and licochalcone a from licorice by high-speed counter-current chromatography[j]. j chromatogr a. 2004, 1048(1): 51.

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  [4]cui ym, ao mz, li w, et al. anti-inflammatory activity of licochalcone a isolated from glycyrrhiza inflata [j]. z naturforsch, 2008, 63c: 361.

  [5]haraguchi h, tanimoto k, tamura y, et al. mode of antibacterial action of retrochalcones from glycyrrhiza inflata [j]. phytochemistry, 1998, 48(1): 125.

  [6]iwata s, nishino t, inoue h, et al. antitumorigenic activities of chalcones (ii). photo-isomerization of chalcones and the correlation with their biological activities[j]. biol pharm bull, 1997, 20(12): 1266.

  [7]chen m, zhai l, christensen sb, et al. inhibition of fumarate reductase in leishmania major and l. donovani by chalcones [j]. antimicrob agents chemother, 2001, 45(7): 2023.

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