作者：梁妍， 叶兰， 郝小燕， 官志忠， 罗俊
【摘要】 目的研究天参益智胶囊对d-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响，探讨其抗衰老的作用及机理。方法采用morris水迷宫进行行为学测试，以gsh-px，sod，ache，chat，mda为指标，观察其对衰老小鼠学习记忆的影响。结果不同剂量的天参益智胶囊均能提高小鼠学习记忆成绩，使小鼠血清中gsh-px，sod及chat活性升高，ache活性及mda含量降低。结论天参益智胶囊对d-半乳糖所致衰老小鼠的学习记忆能力下降有明显保护作用，其作用机制可能与其抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶作用密切相关。
【关键词】 天参益智胶囊 d-半乳糖 学习记忆 衰老
abstract:objectiveto investigate the effect of tianshenyizhi capsule on learning and memory of aging mice caused by smorris maze test was used to determine the learning and memory ability, the activities of gsh-px, sod, ache and chat, and content of mda in blood serum were measured respectively. resultscompared with model group, tianshenyizhi capsule in different dosages could improve the learning and memory ability of mice, increase the activities of gsh-px, sod and chat, and decrease activity of ache and content of mda in serum. conclusiontianshenyizhi capsule has significant protective effect against the decrease of learning and memory of aging mice caused by d-galactose and the mechanism to the elevation of antioxidase activity and decrease ache activity.
key words:tianshenyizhi capsule; d-galactose; learning and memory；senility
天参益智胶囊是在中医抗衰老经验方的基础上研制而成，该复方由天麻、人参等药材组成，具有补气健脑、扶正固本、开窍益智等功能。本 论文 旨在探讨该复方对抗衰老、改善记忆的作用机制，选用了d-半乳糖衰老动物模型，采用morris 水迷宫实验进行行为学测试，检测体内相关指标以验证其疗效并阐明其可能的作用机制。
1 材料与仪器
1.1 动物昆明种小鼠，雌、雄各半，体重（22 ±2）g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：scxk（黔）2004-0001。普通饲料饲养，清洁级，光照时间12/12，室温22～23℃。
1.2 仪器morris水迷宫；bi 2000图像分析系统(成都泰盟公司产品) 。
1.3 药品与试剂天参益智胶囊（由贵阳医学院药学院分析化学教研室提供）；d-半乳糖（美国amresco公司）；健脑胶囊（青岛国风药业股份有限公司）。
2 方法
2.1 动物分组、造模方法及给药方案昆明种小鼠（雌、雄各半）进行morris水迷宫实验，直到定向航行实验成绩稳定为止（连续两天成绩差异无显著性）。将经morris水迷宫筛选合格的84只小鼠随机分为6组(n=14)，分别为正常对照组（ns 14 ml·kg-1）、模型组（ns 14 ml·kg-1）、复方高、中、低（天参益智胶囊1.52，0.61，0.30 g·kg-1）剂量组及阳性对照组（健脑胶囊，0.03 g·kg-1）。除正常对照组外，其余各组均采用皮下注射5％d-半乳糖溶液0.5 ml·kg-1造模，然后连续灌胃给药45 d。
2.2 morris水迷宫行为测试水迷宫［1,2］由圆形水池、安全岛和记录系统3部分组成。水池直径130 cm，高60 cm，水池内壁涂成乳白色。池中水深30 cm，水温保持在(24 ± 2)℃，用奶粉使池水浑浊。池壁标记4个入水点，将水池分为四个均等的象限，池壁上固定位置贴有一幅画作为参照物。安全岛置于第1象限中点，直径10 cm，高28 cm，距水面2 cm。记录系统为成都泰盟公司提供的bi 2000系统的行为学检测模块。从第39天开始进行定位航行实验，连续测试5 d。将小鼠从安全岛之外的3个象限任一入水点面向池壁放入置有安全岛的水池中，经bi 2000图像处理系统自动记录小鼠在120 s内找到安全岛的时间（逃避潜伏期）和游泳路径（搜索距离），并让小鼠在岛上停留10 s。超过120 s找不到安全岛的记为120 s，并引导小鼠上安全岛。定位航行实验结束后，间隔1天，拆除安全岛，将小鼠从同一入水点放入池中，记录小鼠在120 s内寻找安全岛过程中在原安全岛所在象限内的搜索时间（空间探索时间）及探索距离。
2.3 生化指标测定行为学测试结束后，小鼠眼眶采血，分离血清，测定小鼠血清中gsh-px，sod，ache，chat活性及mda含量。
2.4 统计学处理数据处理采用±s表示，组间均数比较采用方差分析和t检验。
3 结果
3.1 对d-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆能力的影响对比模型组和给药组小鼠空间探索实验成绩，显示小鼠给药后学习记忆水平提高，探索时间缩短、探索距离减小，与模型组比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01），提示天参益智胶囊对衰老小鼠的学习记忆能力有明显的改善作用。结果见表1。表1 小鼠空间探索实验结果（略）与正常对照组比较，*p< 0.05，**p< 0.01；与模型组比较，△p< 0.05，△△p< 0.01；n=14
3.2 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中gsh-px和sod活性及mda含量的影响模型组小鼠血清中gsh-px和sod活性降低，mda含量升高，与正常对照组有显著性差异（p<0.05或p<0.01）。灌胃给药后小鼠血清中gsh-px和sod活性升高，mda含量降低，与模型组比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01），提示天参益智胶囊具有较明显的抗氧化和减弱自由基损伤的作用。结果见表2。表2 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中gsh-px和so（略）与正常对照组比较，*p< 0.05，**p< 0.01；与模型组比较，△p< 0.05，△△p< 0.01；n=14
3.3 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中ache和chat活性的影响模型组小鼠血清中chat活性降低，ache活性升高，与正常对照组有显著性差异（p<0.05或p<0.01）。灌胃给药后小鼠血清中chat活性升高，ache活性降低，与模型组比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01），提示天参益智胶囊具有一定的抑制乙酰胆碱脂酶活性。结果见表3。表3 对d-半乳糖所致衰老小鼠血清中ache和chat活性的影响 （略）与正常对照组比较，*p< 0.05，**p< 0.01；与模型组比较，△p< 0.05，△△p< 0.01；n=14
4 讨论
本实验用morris水迷宫观察了天参益智胶囊对d-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响。结果表明，天参益智胶囊明显改善了该模型小鼠的学习记忆能力，表现为明显缩短了空间探索实验中小鼠的探索时间和探索距离。
gsh-px和sod是体内重要的抗氧化酶类，在机体抗氧化损伤中起着重要作用。mda 是体内自由基对不饱和脂肪酸引发的脂质过氧化反应的最终分解产物，其含量的多少可以反映体内自由基的多少及其反应强度。mda 含量的增加可能是体内自由基生成异常或机体抗氧化保护系统的抗氧化能力减弱。天参益智胶囊明显提升了d-半乳糖所致衰老小鼠血中这两种酶的活性，同时降低了该模型小鼠血中mda的含量，说明其具有较明显的抗氧化活性。
中枢胆碱能系统与学习记忆功能密切相关。本研究显示天参益智胶囊能显著提高d-半乳糖所致衰老小鼠血中chat活性，抑制ache活性，提示天参益智胶囊改善中枢胆碱能系统功能是其增强模型小鼠学习记忆能力的基础。
以上实验结果提示天参益智胶囊抗衰老的作用机制与其抗氧化作用和乙酰胆碱酯酶抑制活性有关。
【 参考 文献 】
［1］陈 奇.中药药理研究方法学［m］.北京:人民卫生出版社, 2004: 33.
［2］morris rg, garrud p, rawlinst jn, et al. place navigation impaired in rats with hippocampal lesions［j］.nature, 1982, 297(5868): 681.
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