作者：刘梅，张宁，王拥军，张钰泉，周重建
【摘要】 目的确定复方芪麝片中青风藤、防己药味提取工艺。方法采用正交实验法以粉防己碱和青藤碱含量为指标，考察乙醇浓度、乙醇量、提取时间、提取次数4个因素对青风藤等药味提取工艺的影响。结果药材以70%的乙醇为提取液，加醇量为药材的14倍，提取3次，2 h/次。结论该优化工艺可行。
【关键词】 复方芪麝片； 正交实验； 提取工艺； 粉防己碱和青藤碱
复方芪麝片为主治气虚血瘀兼痰湿阻络型颈椎病的中药复方制剂,由黄芪、麝香、青风藤、川芎等中药组成,具有益气活血、化痰通络、消肿止痛的作用，临床效果较好。方中青风藤为臣药，防己为佐药，其主要有效成分均为生物碱，即粉防己碱和青藤碱。现代药理研究证实青藤碱具有抗炎、免疫抑制、镇痛、降压、抗心律失常等药理作用［1,2］。易丹丹等［3］研究发现青藤碱凝胶对大鼠佐剂性关节炎具有治疗作用,且效果良好。粉防己碱具有广谱抗炎作用, 对局部和全身的多种急、慢性炎症、免疫性炎症、烟雾吸入性肺损伤、四氯化碳性肝损伤均有显著的抑制作用，其抗炎作用是多方面的,对炎症的各个环节均有不同程度的抑制作用［4,5］。此外粉防己碱还具有抗心肌缺血、抗肿瘤等作用［6,7］。根据方中两药味有效成分理化性质的特征，本研究选择乙醇作为提取溶剂，拟通过正交实验对醇提工艺中乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数这4个因素进行考察，以粉防己碱和青藤碱含量为指标成分筛选工艺条件。
1 材料与仪器
防己购自上海养和堂药材有限公司，经上海中医药大学生药教研室鉴定为防己科植物粉防己stephania tetrandra s. moore的干燥根。
青风藤购自上海养和堂药材有限公司，经上海中医药大学生药教研室鉴定为防己科植物青藤sinomenium acutum (thunb.) rehd. et wils.及毛青藤 (thunb.)rehd. et wils. var. cinerum wils.的干燥藤茎。
粉防己碱、青藤碱对照品：含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。agilent 1100色谱工作站。
2 方法与结果
2.1 因素水平表根据文献资料和预实验结果，采用正交实验法以乙醇浓度（a）、乙醇用量（b）、提取时间（c）、提取次数（d）为考察因素，各取3水平，具体因素水平见表1。表1 提取工艺优选水平（略）
2.2 醇提实验根据表1，选用l9正交表，按各实验号进行实验。每次实验按处方量称取青风藤120 g，防己90 g，加热回流，提取液进行浓缩，称重，计算得膏率，分别称取各组浸膏适量，甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，得9组供试品，分别测定青藤碱和粉防己碱的含量，测定青藤碱的hplc条件：十八烷基硅烷为填充剂；甲醇乙腈水二乙胺（18∶14∶58∶0.1）为流动相；检测波长为265 nm。测定粉防己碱含量的hplc条件：十八烷基硅烷为填充剂；甲醇乙腈水二乙胺（70∶10∶20∶0.1）为流动相；检测波长为283 nm。
2.3 正交实验及方差分析见表2～3。表2 正交实验设计（略）表3 方差分析（略）
x：青风藤为方中臣药，防己为佐药，所以经过加权后，x=青风藤×60%+防己×40%。x1，x2分别表示两次重复实验所得数据经加权后的数值。
f0.05(2,17)=3.59,f0.01(2,17)=6.11,由方差分析表可知，4因素均有显著性差异，根据实验结果, 因素d应取d3，即提取3次。因素b应取b3，即加10倍量醇。因素a应取a2,即70%醇提。因素c 应取c2，即提取时间为2 h。
2.4 乙醇用量的单因素考察在其他因素确定的前提下，以粉防己碱和青藤碱含量为指标成分考察乙醇用量为14倍，18倍时工艺提取情况。结果见表4。表4 乙醇用量的单因素考察（略）
乙醇用量为14倍时，提取的指标成分含量高，因此确定乙醇用量为14倍。
2.5 工艺验证取同样药材，按上述优选工艺进行操作，粉防己碱含量为0.34%。青藤碱含量为0.58%（与药材比）。
3 讨论
根据正交实验，确定防己和青风藤最佳提取工艺为以70%醇浓度的乙醇为提取液，加醇量为药材的16倍，提取3次，2 h/次。
防己、青风藤提取工艺中所依据的指标，采用的是将粉防己碱和青藤碱含量进行加权后的数值。加权系数应根据两味药物在方中所起的作用进行慎重选择，本实验确定臣药青风藤的加权系数为0.6，佐药防己的加权系数为0.4。
正交实验中，因素b和d均具有显著性差异，根据极差分析，所取水平均为设定的最高水平，因此应考察加醇量在10倍以上，提取次数在3次以上时的情况。结合大生产的实际情况和两因素的交互作用，确定提取次数为3次，在此基础上，对乙醇用量进行单因素考察，实验结果表明，当乙醇用量为药材量的14倍时，成分含量较高，提取较完全。
【参考文献】
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［7］常 超,王裕勤,杨 刚,等.粉防己碱对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制［j］.中国临床康复，2006，10（43）：88.
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