作者：曹延杰，李飞，谭鹏，李曼玲
【摘要】 目的研究女贞子炮制前后5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-hmf）的含量变化。方法制备不同炮制条件的女贞子，采用hplc法测定女贞子生品及炮制品中5-hmf的含量。结果女贞子生品未检测到5-hmf，炮制后产生5-hmf，不同炮制品中的含量依次为：酒炖品＞清蒸品＞酒蒸品，且随蒸制时间延长含量增加。结论首次建立了hplc测定女贞子中5-hmf含量的方法，该法稳定可靠，可用于其质量控制；蒸制方法和蒸制时间均对5-hmf的含量变化有影响，这种改变是否与炮制增效有关，值得进一步研究。
【关键词】 女贞子； 蒸制； 5-羟甲基糠醛； 高效液相色谱法
abstract：objectiveto investigate the changes of 5-hmf contents in ligustrum lucidum ait before and after processing. methodshplc was used to determine the changes of 5-hmf contents in ligustrum lucidum ait and its’ different processed products. results 5-hmf was not found in ligustrum lucidum ait, but generated and increased with the extension of processing time, the differences of 5-hmf contents in different processed products was significant, and that in products stewed with wine was better than that in steamed one, while that in products steamed with wine was the least. conclusionan hplc method to determine the contents of 5-hmf was established. the proposed method is stable, reliable and can be used for quality control. both of steam method and steam time influence the content changes of 5-hmf, and it is worth further studying whether these changes are related to synergy in processing.
key words：ligustrum lucidum ait; processing; 5-hmf; contents
女贞子为木犀科植物女贞ligustrum lucidum ait.的干燥成熟果实，系临床常用中药，具有滋补肝肾，明目乌发之功效［1］。2005年版《中国药典》规定其炮制方法为酒蒸或酒炖。女贞子酒制后补益作用增强。5-hmf是葡萄糖、果糖等六碳糖在酸水条件下的热分解产物，广泛存在于可发生糖的热降解反应的食品和植物中。研究表明，5-hmf具有抗氧化、抗心肌缺血、改善血管微循环、促进免疫系统功能等药理作用［2］，地黄、山茱萸等在蒸制过程中5-hmf含量均有较大幅度的增加［3,4］，目前尚未见女贞子中5-hmf的相关研究报道。因此，作者建立了女贞子中5-hmf的含量测定方法，并对不同蒸制方法制备的女贞子饮片中5-hmf的含量进行比较，为进一步研究女贞子的蒸制增效机理提供科学依据。
1 材料
1.1 仪器与试药
agilent1100高效液相色谱仪(在线脱气机、四元泵、vwd 检测器)；电子分析天平（感量0.000 01，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；tcq-250型超声波清洗器（北京医疗设备二厂）。
5-hmf对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111626-200804，hplc色谱归一化法测定纯度＞98%）；圣塔黄酒（绍兴市东湖酒业有限公司，总糖≤15.0 g·l-1，酒精度≥8.0%）；乙腈为色谱纯；娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。
1.2 实验药材
女贞子药材（产地浙江）购自北京市白塔寺药店，经北京中医药大学张贵君教授鉴定为木犀科植物女贞ligustrum lucidum ait.的干燥成熟果实。
2 方法与结果
2.1 炮制品的制备生品：去除枝梗后干燥成熟的女贞果实；清蒸品：净女贞子100 g，置蒸锅内分别蒸4，8 h，取出干燥；酒蒸品：净女贞子100 g，加黄酒20 ml，拌匀，闷润后置蒸锅内分别蒸4，8 h，取出干燥；酒炖品：净女贞子100 g，加黄酒20 ml，拌匀，密闭，闷润后置蒸锅内分别炖4，8 h，取出干燥。
2.2 5-hmf的含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取5-hmf对照品5.98 mg，置25 ml的棕色容量瓶中，加无水甲醇至刻度，配成浓度为0.239 2 mg·ml-1的标准储备液。精密量取5-hmf标准储备液1.0 ml，置25 ml的棕色容量瓶中，加无水甲醇至刻度，配成浓度为9.568 μg·ml-1的对照品溶液，摇匀，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备精密称取样品粉末（过40目筛）1.0 g，精密加80%甲醇20 ml，称重，室温超声20 min，放置，加80%甲醇补足重量，摇匀，过滤，然后过0.45 μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液，备用。
2.2.3 色谱条件色谱柱：diamonsil c18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（12∶88），流速：1.0 ml·min-1，柱温：25 ℃；检测波长：284 nm，进样量：10 μl。
2.2.4 方法学考察标准曲线的绘制：分别精密吸取5-hmf对照品溶液1，2，4，6，8，10 μl，注入高效液相色谱仪，分别在上述色谱条件下测定峰面积。以标准品质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程：y=7 568.8x+9.106 6，r=0.999 9。结果表明，5-hmf在9.568×10-3～95.68×10-3 μg范围内线性关系良好。
精密度实验：取9.568 μg·ml-1的5-hmf对照品溶液连续进样6次，每次10 μl，测定峰面积，结果rsd为0.80%，表明仪器精密度良好。
重复性实验：精密称取酒炖8 h女贞子饮片1.0 g，照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μl，测定峰面积，结果rsd为2.73%，表明该方法重复性良好。
稳定性实验：精密称取酒炖8 h女贞子饮片0.999 5 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，于配置后0，2，4，6，8，10 h分别进样10 μl，测定峰面积，计算rsd为1.89%，表明供试品溶液在10 h内稳定。
回收率实验：精密称取酒炖8 h女贞子饮片0.5 g，加入浓度为0.239 2 mg·ml-1的对照品储备液100 μl，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，进样10 μl测定峰面积，重复6次，计算平均回收率为100.03%，rsd为2.70%。
2.2.5 炮制品含量测定将不同蒸制方法制备的女贞子炮制品，照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μl，依法测定峰面积，计算含量。色谱图见图1，结果见表1。表1 女贞子样品5-hmf含量测定结果（略）
3 讨论
由实验结果可知，女贞子生品不含5-hmf，蒸制后产生，其含量依次为酒炖8 h＞清蒸8 h＞酒炖4 h＞清蒸4 h＞酒蒸8 h＞酒蒸4 h。即相同蒸制时间下，酒炖品＞清蒸品＞酒蒸品。若蒸制方法相同，则随蒸制时间的延长5-hmf含量明显升高。表明蒸制方法和蒸制时间对女贞子中5-hmf含量的影响不同。
酒炖品收率和5-hmf含量均明显高于清蒸品和酒蒸品，可能与密闭蒸时可防止酒的挥散及水溶性成分流失有关。表明女贞子传统常采用酒炖的方法炮制具有一定的科学性。
本文建立了女贞子中5-hmf 的hplc含量测定方法，该方法操作简单，结果稳定可靠，可为女贞子的质量控制提供科学依据。
女贞子蒸制过程中5-hmf含量的变化规律与糖类成分的变化之间的关系以及与补益作用增强的关系正在进一步研究中。
【参考文献】
［1］国家药典委员会．中国药典,ⅰ部［s］．北京：化学工业出版社，2005：31．
［2］耿放，王喜军．5-羟甲基-2-糠醛（5-hmf）在中药复方中研究现状及相关药效探讨［j］．世界科学技术-中医药现代化，2005，7（6）：52．
［3］朱梅芬，刘向前，吴柱熹，等．地黄的炮制对梓醇和5-羟甲基糠醛含量的影响［j］．中国中药杂志，2007，32（12）：1155.
［4］杜伟锋，丁 霞，蔡宝昌．山茱萸炮制前后5-羟甲基糠醛的含量变化研究［j］．中成药，2007，29（12）：1801.
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