【摘要】 目的研究复方心脑肾康对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法连续给大鼠灌胃复方心脑肾康10 d后,以结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型（mir）,缺血30 min再灌注60 min后检测心肌丙二醛(mda)的含量及超氧化物歧化酶(sod)、活性氧(ros)、一氧化氮合酶(nos)、atp酶的活性,并观察心肌组织的病理改变。结果与模型组相比，高、中、低3个剂量心脑肾康用药后均能减轻缺血后心肌细胞的病理损伤，显著降低了心肌组织匀浆中mda的含量及ros，nos活性,增加sod，atp酶活性（p<0.05)并呈剂量依赖性，其中,高剂量效果最好,优于阳性对照药(p<0.05)。结论心脑肾康对心肌缺血损伤具有良好的保护作用。
【关键词】 复方心脑肾康； 心肌缺血； 保护作用
abstract:objectiveto study the protective effects of xinaoshenkang(xnsk) on the acute myocardial ischemia-reperfusion injury in sthe acute myocardial ischemia-reperfusion injury model of rats given xnsk by intragastrical injection for 10 days was establishied by ligation of left anterior descending coronary artery for 30 minutes,followed by reperfusion for 60 minutes .the pathological changes of myocardium was observed and the content of mda,the activities of sod,ros,nos and atpase in myocardial homogenate were scompared with model group, xnsk at high, middle, low dosage lessened the degree of myocardial injury and decreased the content of mda,the activities ros,nos and increased the activities of sod, atpase significantly(p<0.05) in a dose dependent manner. the high dosage had better effect than positive control group (p<0.05). conclusionxnsk has good protective effects against the acute ischemic myocardium.
key words:xnsk; myocardial ischemia; protective effect
复方心脑肾康(xnsk)由茶多酚(tp)、银杏提取物(egb761)、三七总皂苷(pns)、丹参素(ds)配伍而成，以上各成分按一定比例配成xnsk, tp作为该复方中的主药（占总量的40%)和质量控制指标，并用1‰二甲基亚砜生理盐水助溶。其主要成分tp具有抗氧化、抑制血小板聚集、抗血栓等作用,佐以egb761、ds等活血化瘀药,通过动物实验观察其对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,为心肌缺血的新药开发提供实验依据。
1 材料与仪器
1.1 药物复方心脑肾康(xnsk)由本课题组研制，已通过急毒和长毒实验，组方中各活性提取物均购自成都华高天然药物有限公司,包括tp(纯度98%批号:20031108),egb761(总黄酮/总内酯≥24:6,批号:20030710)，pns(纯度90%,批号:20030911),丹参水溶性提取物(3%rs,批号:20030815),以上各成分按一定比例配成复方；复方丹参片(ffds): 安徽华佗国药厂，批号：z34020961。
1.2 试剂mda，sod，ros，nos，atpase，考马斯亮蓝试剂盒，均为南京建成生物工程研究所产品。
1.3 仪器dh-1型动物人工呼吸机,722n紫外分光光度计,高速冷冻离心机。
2 方法
2.1 分组及给药将动物随机分为假手术组，缺血模型对照组，xnsk低、中、高剂量组，阳性对照组共6组，各组均于术前10 d开始灌胃给药,1次/d（假手术组和缺血模型对照组给予同体积的生理盐水），术前禁食12 h,第10天最后1次于缺血前60 min给药，参考文献方法［1］制备mir模型。再灌注 60 min后各组动物实验完毕，摘除部分结扎线以下左心室心肌，冰浴中制备成10%的组织匀浆，按试剂盒说明书，测定各组心肌mda，sod，ros，nos，atp酶的含量。部分心肌用10%甲醛溶液固定，制成石蜡切片，苏木素－伊红(he)染色，病理图像分析仪下观察。
2.2 统计方法实验数据用 ±s 表示,采用spss13.0统计软件,结果进行t检验。
3 结果
复方心脑肾康对大鼠心肌组织生化指标及atp酶的影响见表1～2，心肌组织的病理改变见图1～3。
从表1 ～2可见，3个剂量的xnsk用药后均使大鼠的心肌组织mda的含量及ros，nos活性显著降低，sod和atp酶活性显著升高（p<0.05），高剂量组的保护作用强度优于ffds组（p<0.05）。表1 心脑肾康对大鼠心肌组织生化指标的影响，表2 心脑肾康对大鼠心肌组织atp酶的影响（略）。
由图1～3看出，缺血模型对照组心肌排列紊乱，细胞肿胀明显，肌纤维部分断裂，可见心肌细胞成片状坏死，坏死区细胞核碎裂或崩解，周围有炎性细胞浸润。高剂量xnsk组心肌细胞排列规整，部分心肌细胞水肿变性，可见点状的心肌细胞坏死，未见成片状坏死，周围有少量炎性细胞浸润。阳性对照组心肌受损程度与中剂量xnsk 组相近。
4 讨论
目前实验研究心肌缺血再灌注损伤（mir）最常用的模型有结扎冠状动脉左前降支（lad）、注射异丙肾上腺素、注射垂体后叶素。结扎lad导致心肌持续缺血进而梗死为最经典的心肌缺血再灌注损伤模型，与人体发生急性心肌梗塞的生理、病理过程最相似。
tp在体内具有很强的清除自由基、抑制脂质过氧化损伤的能力，其抗氧化作用是传统抗氧化剂维生素e的18倍、维生素c的16倍，其中egcg发挥着主要功效［2,3］。egb761能维持心肌膜相结构的完整性、提高心肌对缺血-再灌注损伤的耐受性，对于预防心肌缺血再灌注损伤具有显著作用［4～6］。pns可使大鼠的增快心率及高耸的t波恢复，心肌组织na+-k+atpase和ca2+-mg2+atpase活性明显增加，从而对心肌损伤具有保护作用［7］。本研究将上述4种活性成分以低于它们中每一单体的治疗剂量有机配伍,抗过氧化损伤是4种活性成分的共性，但是其作用强度、作用靶点及机制又有差异，从而有理由相信它们组方后因成分优势互补、协同增效而对心肌急性损伤有着强大保护作用。
sod是生物体内清除活性氧自由基的重要酶类，其活力高低可以间接反映机体清除氧自由基的能力，而mda作为脂质过氧化的数终产物成为研究抗氧化功能的常用检测指标之一。no对心肌的收缩起一种双向调节作用，低浓度时促进心肌的收缩，高浓度时则起抑制作用［8］。而心肌缺血再灌注损伤后，细胞内ca2+超载导致能量代谢障碍，atp酶活性降低。从实验结果看出: 心脑肾康可明显降低心肌组织匀浆nos,ros和mda含量，升高sod与atp酶活性并明显改善受损心肌组织病理学形态，表明心脑肾康对急性心肌缺血具有显著的抗氧化损伤作用, 且呈剂量依赖性。
本研究实验结果表明,对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用比复方丹参片更强，并有显著性差异且毒副作用小,有望开发成为一种防治心肌缺血损伤的新药,给临床的治疗提供了一种选择。
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