摘 要：目的：探讨苯接触和慢性苯中毒患者外周血淋巴细胞亚群及T细胞水平的变化。方法：选取收治的慢性苯中毒患者16例和苯接触生产者20例，测定外周血淋巴细胞亚群分布和T细胞水平变化，探讨慢性苯中毒和长期低剂量苯接触对患者机体免疫系统造成的影响。结果：苯接触生产者与慢性苯中毒患者的总T细胞比例显著低于对照组，CD8T细胞比例显著高于对照组，P＜0.05，苯接触者和慢性苯中毒患者外周血CD4T细胞比例、B细胞比例以及NK细胞比例，与对照组相比均呈逐渐降低趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：早期检测外周血淋巴细胞亚群分布及变化有助于诊断和治疗。
关键词：苯接触；慢性苯中毒；淋巴细胞亚群；T细胞
很多工业原料都会用到苯，苯具有骨髓抑制和细胞毒性，影响机体免疫功能。随着工业现代化的进程和生产工艺的进步，临床上职业性苯中毒患者明显降低，但长期接触低浓度苯还是会影响一线生产工作人员的身体健康，往往这些工人不出现中毒状况，但身体多处于亚健康状态，处于慢性苯中毒的临床亚状态，影响机体免疫功能。外周血淋巴细胞亚群的分布、数量、结构以及功能种类的变化，直接反映出机体免疫功能状态[1]。目前苯中毒的发病机制临床尚不十分明确，但多数学者普遍认为免疫调节系统紊乱是苯中毒的直接发病机制[2]。外周血淋巴细胞是一类细胞具有高度异质性的细胞。其中B细胞直接介导体液免疫，T细胞介导细胞免疫。T细胞在发育过程中分化抗原不同，又分为CD4T细胞和CD8T细胞亚群。NK细胞是天然的免疫监视和免疫调节细胞。这些外周血淋巴细胞亚群的变化与一些慢性炎性反应疾病密切相关。本研究选取2006年1月～2010年10月间收治的慢性苯中毒患者16例和苯接触生产者20例，测定外周血淋巴细胞亚群分布和T细胞水平变化，探讨慢性苯中毒和长期低剂量苯接触对患者机体免疫系统造成的影响，帮助临床治疗并提高患者生活质量。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取我院2006年1月～2010年10月间收治的慢性苯中毒患者16例和苯接触生产者20例，作为研究对象，入选36例患者均为长期接触苯中毒的工人，其中男19例，女17例，年龄26～49岁，平均36.4岁。其中油漆工人10例，喷漆工人12例，调漆工人9例，其他5例。所有入选患者排除继往造血障碍性疾病和免疫功能障碍疾患、严重肝肾疾病、肿瘤病史并排除放化疗史。所有患者首次就诊3个月内未使用影响免疫功能药物。另选10例未接触苯的门诊体检健康人群作为对照组，与慢性苯中毒患者和苯接触生产者在年龄和性别上比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，所有入选患者均知情，并同意参加实验研究。
1.2 检验：所有入选研究对象均清晨采集空腹肘静脉，置于肝素抗凝管内，采用间接免疫荧光法，应用流式细胞仪进行测定，分别标记CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD56单克隆抗体，混匀，室温暗处30 min，结合GAM-IgG-FITC二抗，1 500 rmp/min离心5 min，弃上清，加入PBS，流式细胞仪检测，获取5 000个淋巴细胞统计分析。分别测定各个外周血淋巴细胞亚群，包括总T细胞比例（CD3+）、CD4T细胞比例（CD3+、CD4+）、CD8T细胞比例（CD3+、CD8+），B细胞比例（CD19+、CD3-）以及NK细胞比例（CD16+、CD56+）。
1.3 统计学方法：采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，其中计量资料采用t检验或秩和检验进行分析，计数资料应用χ2检验，相关性采用秩相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
测定入选研究对象外周血淋巴细胞亚群分布和T细胞水平变化，可见苯接触生产者与慢性苯中毒患者的总T细胞比例显著低于对照组，CD8T细胞比例显著高于对照组，P＜0.05，而且慢性苯中毒患者的总T细胞比例和CD8T细胞比例均分别低于和高于苯接触患者，可见总T细胞比例和CD8T细胞比例与苯造成的慢性中毒密切相关，达到一定临界值时苯接触者有发生慢性苯中毒的大概率事件。苯接触者和慢性苯中毒患者外周血CD4T细胞比例、B细胞比例以及NK细胞比例，与对照组相比均呈逐渐降低趋势，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。
表1 苯接触和慢性苯中毒与对照组外周血淋巴细胞亚群比较（，%）
分组例数总T细胞CD4T细胞CD8T细胞B细胞NK细胞对照组
苯接触
慢性苯中毒10
16
2064.9±9.4
54.3±7.0①
46.2±11.3②41.3±6.2
39.2±4.6
37.4±9.527.5±7.1
39.4±11.2①
45.3±9.6②13.0±3.2
12.7±4.6
11.9±2.618.9±4.5
16.7±5.3
15.2±5.1注：与对照组比较，①P＜0.05，②P＜0.05
3 讨论
长期接触苯可造成慢性苯中毒，苯具有细胞毒性和骨髓抑制作用，进入机体后干扰机体免疫系统，影响外周学淋巴细胞亚群功能。外周血淋巴细胞亚群可直接反映出人体机体免疫系统稳定性，CD4T细胞具有诱导和辅助T细胞作用，增强机体免疫应答，CD8T细胞则包括免疫杀伤以及抑制免疫应答的作用[3]。所用通过外周淋巴细胞亚群中CD4和CD8细胞的平衡可驱使机体是否产生免疫应答。本研究结果表明苯接触生产者与慢性苯中毒患者的总T细胞比例显著低于对照组，CD8T细胞比例显著高于对照组，而且慢性苯中毒患者的总T细胞比例和CD8T细胞比例均分别低于和高于苯接触患者，可见总T细胞比例和CD8T细胞比例与苯造成的慢性中毒密切相关，达到一定临界值时苯接触者有发生慢性苯中毒的大概率事件。苯接触者和慢性苯中毒患者外周血CD4T细胞比例、B细胞比例以及NK细胞比例，与对照组相比均呈逐渐降低趋势，差异无统计学意义（P＞0.05）。接触苯和慢性苯中毒患者CD4和CD8T细胞亚群的变化，抑制机体总体免疫水平。接触苯人群中CD4和CD8T细胞变化与慢性苯中毒患者相类似，所以长期接触苯人群虽未出现苯中毒的临床症状，但临床亚症状也需值得重视。总T细胞比例的变化很可能是由于CD8T细胞比例升高造成[4]。通常认为CD8T细胞为一种细胞毒性的T淋巴细胞，可受细胞毒性分子介导溶解靶细胞，慢性苯中毒患者外周血CD8 T细胞增加可加剧炎性反应因子的释放，加重对组织造成的损伤[5]。同时CD8T淋巴细胞存在着诸多细胞亚群，慢性苯中毒患者中CD8T细胞的变化，应该注意进一步探讨CD8T细胞亚群内的变化[6]。当然总T细胞比例的增加也存在其他因素的影响。本研究中未发现CD4T细胞比例、B细胞比例和NK细胞比例的显著变化，没有发生变化的原因不能认为其不发生变化，主要原因还是由于存在的多个亚群，整体数量不变不能表示其内部亚群数量不变。
本研究结果表明苯可造成接触者外周血淋巴细胞亚群的变化，通过对患者外周血淋巴细胞亚群变化的测定可及早发现慢性苯中毒的发生，有助于临床及早采取治疗措施，提高患者生活质量。同时还需进一步将变化明显的细胞如CD8T细胞的各个亚群再进行分析，监测其亚群的变化与机体免疫功能变化的联系。
4 参考文献
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